الخلية العصبية من الثقافات Aplysia عن التصوير عالية الدقة من المخاريط النمو
Summary
Aplysia تطوير الخلايا العصبية californica مخاريط النمو الكبير في الثقافة التي هي ممتازة لتصوير عالية الدقة في القدرة على الحركة مخروط النمو والتوجيه. هنا ، نقدم بروتوكول للتشريح والطلاء خلية من الخلايا العصبية Aplysia حقيبة فضلا عن انشاء غرفة للتصوير الخلايا الحية.
Abstract
المخاريط نمو الخلايا العصبية هي هياكل متحركة غاية في غيض من المحاور التي يمكن الكشف عن توجيه اشارات في البيئة وتنبيغ هذه المعلومات في حركة الاتجاه نحو الخلية المستهدفة المناسبة. لنفهم تماما كيف يتم نقل المعلومات على توجيه من سطح الخلية الأساسية للشبكات هيكل الخلية الحيوية ، يحتاج المرء إلى نموذج مناسب لنظام التصوير خلية حية من البروتين في الديناميات عالية الدقة الزمنية والمكانية. نموذجي مخاريط النمو الفقاريات هي صغيرة جدا لتحليل كمي F – أكتين وديناميات أنيبيب. الخلايا العصبية من californica البحر Aplysia الأرنب 5-10 مرات أكبر من الخلايا العصبية الفقاريات ، ويمكن بسهولة أن تبقى في درجة حرارة الغرفة وخلايا قوية للغاية والقياسات الفيزيائية الحيوية المجهرية. حددت المخاريط نموها جدا هيولي المناطق ونظام جيد وصفها هيكل الخلية. يمكن microinjected الهيئات الخلايا العصبية مع مجموعة متنوعة من التحقيقات لدراسة حركية النمو مخروط والتوجيه. في هذا البروتوكول أن نبرهن على إجراء تشريح العقدة في البطن ، والثقافة ، من الخلايا العصبية الخلية كيس وإنشاء غرفة للتصوير التصوير خلية حية من مخاريط النمو.
Protocol
Discussion
الخلية العصبية Aplysia حقيبة توفير المصل خالية من الخلايا العصبية ثقافة النظام مع الخلايا العصبية غير قليلة جدا. هذه الخلايا العصبية شكل مخاريط نمو كبيرة جدا مناسبة لمعالجة عدد من المسائل الهامة الخلية البيولوجية. يمكن أن الخلايا العصبية الخلية كيس يمكن بسهولة التلاعب بها وتصوير?…
Acknowledgements
نود أن نشكر Maneri ريان (Oystercatcher إنتاجات ، ذ م م) للتصوير الداخلي لدينا ورودني ماكفيل (قسم العلوم البيولوجية ، جامعة بوردو) للمساعدة في تحرير الفيديو تشريح. ويدعم البحوث في المختبر سوتر من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (R01 NS049233) ومركز العلوم البيولوجية بيندلي في جامعة بوردو في DMS
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #1 glass coverslips 22×22 mm | Tool | VWR | 48366067 | |
| #1.5 glass coverslips 22×22 mm | Tool | Corning | 2870-22 | |
| 35 mm Petri dishes | Tool | Falcon | 353001 | |
| Filters for medium filtration | Tool | Millipore | SVGV010RS | |
| High vacuum grease | Tool | Dow Corning | 1597418 | |
| Osmometer | Tool | Wescor | 5520 | |
| Plastic shims | Tool | Small Parts Inc | SHSP-200 | |
| Calcium chloride | Reagent | Fisher | C79-500 | |
| Gentamicin | Reagent | Invitrogen | 15750-060 | |
| HEPES | Reagent | Sigma | H4030 | |
| L15 medium | Reagent | Invitrogen | 41300-039 | |
| L-glutamine | Reagent | Sigma | G8540 | |
| Magnesium chloride | Reagent | Mallinckrodt | 5958-04 | |
| Magnesium sulfate | Reagent | Mallinckrodt | 6070-12 | |
| Poly-L-lysine (70-150 kD) | Reagent | Sigma | P6282 | |
| Sodium chloride | Reagent | Mallinckrodt | 7581 | |
| Neutral Protease (Dispase) | Reagent | Worthington | LS02111 |
Riferimenti
- Forscher, P., Kaczmarek, L. K., Buchanan, J. A., Stephen, S. J. Cyclic AMP induces changes in distribution and transport of organelles within growth cones of Aplysia bag cell neurons. J. Neurosci. 7, 3600-3611 (1987).
- Suter, D. M., Errante, L. D., Belotserkovsky, V., Forscher, P. The Ig superfamily cell adhesion molecule, apCAM, mediates growth cone steering by substrate-cytoskeletal coupling. J. Cell. Biol. 141, 227-240 (1998).
- Schaefer, A. W., Kabir, N., Forscher, P. Filopodia and actin arcs guide the assembly and transport of two populations of microtubules with unique dynamic parameters in neuronal growth cones. J. Cell. Biol. 158, 139-152 (2002).
- Suter, D. M., Schaefer, A. W., Forscher, P. Microtubule dynamics are necessary for SRC family kinase-dependent growth cone steering. Curr. Biol. 14, 1194-1199 (2004).
