Summary

アフリカツメガエルの卵母細胞で発現イオンチャネルのパッチクランプ記録

Published: October 16, 2008
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Summary

これは、アフリカツメガエル卵母細胞からパッチクランプ記録の紹介を目的としています。それは、卵黄膜の除去、gigaohmシール(gigaseal)の形成、および外部のアウトトポロジへのパッチの任意の変換をカバーしています。

Abstract

ザクマンとネーアー1、2による開発以来、パッチクランプ、細胞内の単一または複数のイオンチャネルの電気生理学的測定のための極めて有用な手法として確立されています。この手法は、両方のそれらのネイティブ環境でのイオンチャネルに適用され、そのようなアフリカツメガエル、アフリカツメガエルから採取した卵母細胞として異種細胞で発現することができます。ここで、我々は、アフリカツメガエルの卵母細胞からパッチクランプ記録の十分に確立された技法を説明します。この手法は、個々に個体数(macropatch)または(シングルチャンネル記録)のいずれかで表されるイオンチャネルの特性を測定するために使用されます。私たちは、卵母細胞の準備とシールの世代の品質を最大化するテクニックに焦点を当てる。すべての要因が最適で、この手法は90%以上成功したシールの生成の確率を与える。プロセスは、彼または彼女は最も重要な見つけるの要因に基づいてすべての研究者によって異なって最適化、そして私たちの手で最高の成功につながる持ってアプローチを提示することができます。

Protocol

パート1:卵黄膜を除去する鉗子のセットを2つ準備します。我々は1つのセットが若干ファイルで削ったされている5号鉗子を、好む。また7"パスツールピペットをトリミングし、火災、研磨によってガラスの転送ピペットを準備。 推奨:滑りから卵母細胞を防止するために、グリッドのサークル(1 mmの正方形)をカットと60mmペトリ皿の底に接着剤。使用の間に清潔に?…

Discussion

ここで説明していない電気生理学的記録の多くのパラメータがあります。リグのセットアップ、システムのノイズ管理、チャネルの発現、および記録のプロトコルはすべての良い実験結果にも重要です。

我々の経験では、これらは信頼性の高いシールを形成するための最も重要なパラメータです:風呂に入るときに、高品質の卵母細胞は、(別名、"はがれ")を迅速卵黄膜を除去し、ホコリか?…

Acknowledgements

シュリンキングソリューションのレシピは、RWアルドリッチの研究室からです。国立衛生研究所、国立科学財団、米国心臓協会、筋ジストロフィー協会、ドナルドB.とデリアE.バクスター財団、Klingenstein基金と神経科学のためのマックナイト基金:我々は、サポートについては、次の資金提供機関や財団に感謝します。

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Patch Clamp Amplifier & Software Instrument HEKA or Axon EPC-10 Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B)
No. 5 forceps (two pairs) Tool Fine Science Tools    
Oocyte shrinking solution Reagent     Ingredient In mM N-methyl-D-glucamine 220 HEPES 10 MgCl2 1 EGTA 10 Aspartic Acid 220 KCl 2 pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine
woven mesh 800 um Spectrum Laboratories INC 146481  

Riferimenti

  1. Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260, 799-802 (1976).
  2. Sackmann, B., Neher, E. . Single-channel Recording. , (1983).
check_url/it/936?article_type=t

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Citazione di questo articolo
L Brown, A., E. Johnson, B., B. Goodman, M. Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in Xenopus Oocytes. J. Vis. Exp. (20), e936, doi:10.3791/936 (2008).

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