Патч зажим Запись ионных каналов, выраженные в ооцитов Xenopus
Summary
Это сделано для того, как введение в патч зажим записи с Xenopus laevis ооциты. Она охватывает желточной мембраны удаление, формирование gigaohm уплотнение (gigaseal), и дополнительные преобразования патч для вне-из топологии.
Abstract
С момента разработки Sakmann и 1 Неер, 2, патч зажим было определено в качестве чрезвычайно полезный метод для электрофизиологических измерений одного или нескольких ионных каналов в клетках. Эта техника может быть применена к ионные каналы как в их родной среде и выражается в гетерологичных клетках, таких как ооциты собран из африканских когтистых лягушка, Xenopus laevis. Здесь мы описываем устоявшихся техника патч зажим записи из ооцитов Xenopus. Этот метод используется для измерения свойств выразили ионные каналы либо в популяциях (macropatch) или индивидуально (одноканальный записи). Мы делаем ставку на методы максимального качества подготовки яйцеклетки и печатью поколения. Со всеми факторами оптимизированы, эта техника дает вероятность успешного поколения печать более чем на 90 процентов. Процесс может быть оптимизирован по-разному каждым исследователем на основе факторов, которые он или она считает наиболее важными, и мы представляем подход, которые приводят к наибольшим успехом в наших руках.
Protocol
Discussion
Есть много параметров электрофизиологических записи не обсуждаются. Буровая установка, система управления шумом, канал выражения, а также записи протоколов все же решающее значение для хороших результатов эксперимента.
По нашему опыту, это наиболее важные параметры для формирования надежн?…
Acknowledgements
Сокращение решение рецепт от лаборатории РАО Aldrich. Мы благодарим следующие финансовые учреждения и фонды поддержки: Национальный институт здоровья, Национальный научный фонд, Американской кардиологической ассоциации, Ассоциации мышечной дистрофии, Дональд Б. и Делия Э. Бакстер Фонда Klingenstein фонд и фонд поддержки McKnight Neuroscience.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Patch Clamp Amplifier & Software | Instrument | HEKA or Axon | EPC-10 | Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B) |
| No. 5 forceps (two pairs) | Tool | Fine Science Tools | ||
| Oocyte shrinking solution | Reagent | Ingredient In mM N-methyl-D-glucamine 220 HEPES 10 MgCl2 1 EGTA 10 Aspartic Acid 220 KCl 2 pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine | ||
| woven mesh | 800 um | Spectrum Laboratories INC | 146481 |
Riferimenti
- Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260, 799-802 (1976).
- Sackmann, B., Neher, E. . Single-channel Recording. , (1983).
