ウエスタンブロット法

ウェスタンブロッティングは、電気泳動により分離サンプル中の特定のタンパク質の存在を同定するために使用される。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはSDS-PAGEと呼ばれる手法による分離の後、西洋転送するそれぞれの場所でトラップタンパク質を、膜の一部上にポリアクリルアミドゲルからのタンパク質を移動させるために使用される。次に、膜をimmunboblottingと呼ばれるプロセス中の抗体でプローブされています。イムノブロットは、単一のタンパク質を同定するために必要な高い特異性を提供する、特定の認識部位を通じて抗体タンパク質と抗体 – 抗体結合を使用しています。抗体の検出は、酵素の使用を含むレポーター系を用いて行われる。酵素、抗体の端部に取り付けられ、色または光の変化を生成するために基材と反応することができる。これらの信号は、撮像されデンシトメトリーと呼ばれるプロセスを使用して定量することができる。

このビデオ·記事の概要を示しウェスタン転写、抗体検出の使用、および画像解析を記述することによってウェスタンブロット法。このような転送のサンドイッチと転写条件のアセンブリと西部転送に必要な手順を詳細と同様に抗体結合し、それらの抗体の検出の背後にある理論で説明されています。この技術の広範なアプリケーションは、タンパク質 – タンパク質相互作用、タンパク質複合体中の個々のタンパク質の同定の検出を含むいくつかの例を挙げて説明される。