Una procedura per studiare l'effetto della prolungata restrizione alimentare sulla Cerco eroina nei ratti in astinenza

L'obiettivo generale di questa procedura è studiare gli effetti delle manipolazioni ambientali, come la restrizione cronica del cibo sulla ricaduta alla ricerca di eroina in involucri di laboratorio in condizioni di astinenza. Ciò si ottiene inserendo prima chirurgicamente un catetere endovenoso nella vena giugulare del ratto per consentire l'autosomministrazione di eroina dopo un periodo di recupero. I ratti vengono addestrati ad autosomministrarsi eroina in camere di condizionamento operative per un periodo di 10 giorni.

La fase successiva della procedura è la fase di astinenza in cui i ratti vengono trasportati alla struttura per animali e sottoposti a un periodo di accesso limitato o illimitato al cibo. Infine, i ratti vengono riportati nelle camere di condizionamento operanti per essere sottoposti a un test di ricerca dell'eroina in cui le risposte sulla leva alterata dall'eroina provocano l'attivazione di un segnale, luce e tono in assenza di somministrazione di eroina. In definitiva, i ratti cronicamente limitati dal cibo Con una storia di eroina, l'autosomministrazione mostrerà un forte aumento della ricerca di eroina in condizioni di astinenza, derivante dalla riesposizione all'ambiente di assunzione della droga e dai segnali associati alla droga.

Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la procedura di reintegrazione, è l'assenza di un'esplicita estinzione operante, che non si osserva nella condizione umana. Inoltre, l'uso di manipolazioni croniche rispetto a quelle acute consente una maggiore validità del costrutto rispetto alla condizione umana. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo delle tossicodipendenze, come i meccanismi neurologici comuni alla base dei comportamenti di ricerca di droghe e cibo.

I cateteri sono preparati alla rinfusa e sterilizzati in autoclave per l'uso per un lungo periodo di tempo. Per costruire un catetere, prima taglia il tubo elastico in pezzi lunghi 12 centimetri. Usa uno stuzzicadenti o un ago calibro 18 per posizionare una piccola goccia di silicone attorno al catetere a tre centimetri dalla punta.

Lasciare asciugare il silicone per 24 ore prima di piegare in autoclave il lungo tubo della cannula five up, che fungerà da connettore ad angolo retto rispetto al piedistallo di plastica prima della sterilizzazione in autoclave. Per assemblare i cateteri il giorno dell'intervento, spingere il lato lungo del tubo scolastico sopra il tubo metallico piegato della cannula five up a circa metà del piedistallo di plastica. Collegare il tubo five up tramite un tubo tigon e un ago miscelato calibro 22 a una siringa da un millilitro riempita con soluzione fisiologica sterile.

Lavare la soluzione salina attraverso il catetere per garantire un flusso senza ostacoli. Per iniziare, anestetizzare l'animale prima di raderlo e pulire la zona sulla spalla destra e la testa con alcool e uno scrub chirurgico. Dopo aver applicato il gel sugli occhi per prevenire la secchezza, vengono iniettati penicillina e soluzione salina per proteggere da infezioni e disidratazione.

Utilizzare tecniche standard per esporre la vena giugulare esterna una volta isolata dal tessuto circostante. Inserire una pinza curva sotto la vena per mantenerla sollevata e leggermente allungata. Fai un piccolo taglio a forma di V sulla vena e tieni il taglio aperto.

Utilizzando un dilatatore vascolare, far avanzare la punta corta di tre centimetri del catetere nella vena verso il cuore fino a quando la goccia di silicone non si trova nel punto di incisione. Legare il catetere alla vena con tre punti di sutura, uno il più lontano possibile. Uno è appena rostrale alla goccia di silicone e il terzo il più rostrale possibile.

Far passare la soluzione salina attraverso il catetere per assicurarsi che rimanga ostruito e che le suture non siano troppo strette. Quindi posiziona il ratto con il lato ventrale rivolto verso il basso. Incidere la testa e inserire un emostatico per separare la pelle dal tessuto sottostante e creare una tasca sottocutanea.

Guidare l'emostatico sotto la pelle verso l'apertura sulle spalle dove è stato inserito il catetere. Sfondare il tessuto connettivo e serrare saldamente il catetere nel punto più rostrale sotto la base dei cinque in su. Staccare i cinque verso l'alto e infilare l'estremità lunga del catetere sotto la pelle e fuori dall'incisione situata nella parte superiore della testa.

Usa le forbici per tagliare il catetere sotto il punto in cui è stato bloccato l'emostatico e riattaccare l'estremità lunga dei cinque verso l'alto. Tirare il catetere lungo l'asta metallica dei cinque fino al piedistallo di plastica, far passare la soluzione salina per garantire un flusso libero. Dopo aver chiuso le ferite con punti di sutura, posizionare il ratto in un apparato stereotassico.

Una volta che il cranio esposto è pulito e asciutto, usa una punta da trapano manuale per praticare quattro o cinque fori sulla superficie. Quindi, inserire le viti a macchina nei fori per fungere da impalcatura per il cappuccio della testa. Posizionare il connettore cinque tra le viti e infilare la lunghezza in eccesso del catetere nella tasca sottocutanea realizzata in precedenza.

Infine, usa il cemento dentale per fissare i cinque fino alla parte superiore del cranio. Rimuovere il ratto dall'apparato stereotassico dopo che il cemento è completamente asciutto e monitorarlo fino a quando non si è completamente ripreso. I ratti sono alloggiati individualmente in camere di condizionamento operanti.

Racchiuso in vani fonoassorbenti dotati di ventilatore. Due leve retrattili sono montate a nove centimetri sopra il pavimento della parete laterale destra con una luce di stecca sopra ciascuna leva. Un modulo di tono è posizionato sopra la leva attiva e una luce rossa della casa è posizionata in alto al centro della parete laterale sinistra.

Cibo e acqua sono disponibili a libitum. La pompa del farmaco è collegata al catetere tramite una girella per liquidi e un tubo tigon protetto da una molla metallica. L'autosomministrazione di eroina inizia dopo il recupero dall'intervento chirurgico e un periodo di assuefazione di 24 ore.

Per iniziare, lavare il catetere con una soluzione di eparina gentamicina. Quindi, collegare il connettore five up al tubo Tigon e collegare la molla metallica. Iniziare ogni sessione all'inizio della fase di buio con l'estensione delle leve attiva e inattiva, nonché l'accensione della luce di casa e l'attivazione del complesso di toni di luce Q.

Per 30 secondi, i ratti sono autorizzati ad autosomministrarsi eroina per 10 giorni durante tre sessioni di tre ore separate da intervalli di tre ore. Le risposte sulla leva attiva provocano l'attivazione della pompa del farmaco e l'avvio di un 22° periodo di timeout durante il quale la luce della casa viene spenta e viene attivato il complesso del tono luminoso Q sopra la leva attiva. Le risposte della leva inattiva vengono registrate, ma non hanno conseguenze programmabili.

Dopo l'addestramento all'autosomministrazione, rimuovere i ratti dalle camere di condizionamento operative e alloggiarli individualmente nella struttura per animali con accesso illimitato a cibo e acqua. Per un giorno di washout della droga il giorno successivo, ridurre la quantità di cibo per il gruppo con restrizioni alimentari per iniziare il periodo di astinenza, mantenendo l'accesso illimitato al cibo nel gruppo saziato. Esegui il test di ricerca della droga la mattina dell'astinenza.

Giorno 14, riportare i ratti nelle camere di condizionamento operanti e attaccarli alla molla metallica. Consentire una sessione di una o tre ore durante la quale le risposte di leva attiva e inattiva hanno le stesse conseguenze della formazione di autosomministrazione, escludendo la disponibilità del farmaco. Questi risultati dimostrano che il peso corporeo rimane stabile per tutta l'eroina.

Durante l'astinenza, i ratti con accesso illimitato al cibo aumentano il loro peso corporeo, mentre quelli che hanno limitato il cibo diminuiscono il loro peso corporeo di circa il 10-15%Come si vede qui, le infusioni e le risposte attive della leva sono aumentate durante i giorni di allenamento, mentre le risposte inattive della leva non lo hanno fatto. Dopo il periodo di astinenza, la risposta attiva alla leva per i ratti con cibo limitato è aumentata significativamente rispetto ai ratti sazi. Mentre la leva inattiva, la risposta è minima e confrontabile tra i gruppi Seguendo questa procedura.

Altri metodi, come le iniezioni intracraniche, la microdialisi, il western blotting e le tecniche immunoistochimiche, possono essere utilizzati per colpire specifici sistemi neurochimici e farmacologici. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una chiara comprensione di come impiantare chirurgicamente un catetere endovenoso nella vena giugulare del ratto, nonché di come condurre una procedura di autosomministrazione di eroina in camere di condizionamento operanti standard.