Il nervo sciatico ammanettare modello di dolore neuropatico nei topi

L'obiettivo generale di questa procedura è stabilire un modello murino di dolore neuropatico dopo la compressione del nervo periferico. Dopo aver preparato l'animale per l'intervento chirurgico, il ramo principale del nervo sciatico viene esposto e una cuffia in polietilene viene inserita attorno al nervo. Quindi la ferita viene chiusa.

Per testare la sensibilità della zampa, i topi vengono posti in scatole trasparenti su una piastra di acciaio perforata. Una serie di filamenti di Von Fray sempre più grandi vengono poi applicati alla zampa fino a quando l'animale reagisce in modo coerente alla pressione. In definitiva, la presenza di un'allodinia meccanica di lunga durata e omolaterale alla zampa operata può essere osservata tracciando nel tempo le soglie meccaniche ottenute dal test di Von Fray.

Questo modello può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del dolore, come i meccanismi alla base del dolore neuropatico. Può anche essere utilizzato per studiare i trattamenti attuali per testare gli agenti neo thepath o per studiare le conseguenze anxi depressive del dolore neuropatico. La dimostrazione visiva di questo metodo è tuttavia fondamentale in quanto l'impianto della cuffia è un passaggio difficile da spiegare senza supporto visivo.

Per valutare la soglia di ritiro meccanico della zampa, posizionare prima i topi per l'abitazione in scatole individuali trasparenti su una piastra d'acciaio perforata, fino a 12 animali possono essere testati in parallelo per il test. Utilizzare filamenti von Frey. Questi peli di plastica di diametro calibrato sono attaccati a un applicatore portatile.

Durante la piegatura, ogni filamento esercita una pressione proporzionale al suo diametro. Nei topi, i filamenti più utilizzati vanno dal punto 16 ai 10 grammi. Inizia con la pressione più leggera.

Quando si misurano le soglie per testare i topi, applicare il filamento sulla zampa posteriore sinistra fino a quando i filamenti iniziano a piegarsi. Evita i bordi laterali della zampa, che possono essere più sensibili. L'animale reagisce all'applicazione del filamento.

Se la zampa sussulta o si ritira, ripeti l'applicazione altre due volte e, se l'animale reagisce a tutte e tre le applicazioni, testa l'altra zampa. Altrimenti, applica i filamenti per un totale di cinque volte prima di testare l'altra zampa. Testare ogni mouse consecutivamente con il filamento von Frey scelto, quindi ripetere il processo con il filamento successivo.

Se un animale reagisce tre volte allo stesso filamento, questo è considerato un risultato positivo. Quando due filamenti consecutivi ottengono punteggi positivi, interrompi il test su quella zampa. La soglia di ritiro della zampa è il più basso dei due grammi per un dato topo.

Questi valori possono differire tra le due zampe. Ripetere questa procedura ogni giorno fino a quando almeno tre valori limite consecutivi sono stabili. Quindi procedi con l'intervento chirurgico.

Registra il peso dell'animale, che dovrebbe essere superiore a 20 grammi, e anestetizza l'animale con ketamina e xilazina. Verificare l'assenza di riflessi della zampa o dell'occhio. Applicare un gel protettivo sugli occhi con un tampone.

Quindi radere la gamba destra dal ginocchio all'anca. Quindi posiziona l'animale con la zampa posteriore destra su un piccolo cuscino e fissa questa zampa con del nastro adesivo. Disinfettare la pelle esposta con clorexidina ed etanolo al 70%.

Inizia palpando per trovare il femore. Quindi praticare un'incisione di 0,5 centimetri parallela al femore a circa 1,5 millimetri posteriormente al femore. Ora usando i bastoncini dell'autoclave, separare il muscolo vicino al femore, ma non tagliarli.

Il ramo principale del nervo sciatico dovrebbe essere reso visibile. Se c'è sanguinamento, assicurati di pulirlo con un tampone per i controlli fittizi. Questo completa l'intervento chirurgico per i topi da ammanettare.

Inserisci due bastoncini sotto il nervo sciatico per esporre il ramo principale del nervo. Aggiungi una spruzzata di soluzione fisiologica per idratare il nervo. Ora afferra un polsino diviso con un bastoncino d'acciaio appuntito e un morsetto per bulldog.

Quindi inserire il bulldog e ruotarlo di 180 gradi in modo che tenga il bracciale opposto all'apertura laterale del bracciale. Ora chiudi il bulldog e rimuovi il bastoncino appuntito. Successivamente, chiedi a un assistente di tenere i due bastoncini sotto il nervo e separarli delicatamente.

Per consentire l'accesso al nervo, inserire la cuffia da due millimetri attorno al ramo principale del nervo sciatico. Inizia inserendo la parte del bracciale che è distale al bulldog attorno alla parte del nervo che è prossimale all'anca. Quindi chiudere delicatamente il bracciale con una pinza per assicurarsi che il bracciale sia chiuso correttamente.

Giralo. Ora, togliete i bastoncini e suturate la pelle. Usando i nodi chirurgici, trasferisci il mouse nella sua gabbia domestica pulita, posizionando il mouse sul lato sinistro.

Tienilo caldo con il calore lamp fino a quando non si risveglia. Aggiungi cibo e acqua extra nella gabbia in modo che il topo possa nutrirsi. Gli animali possono essere testati per basse soglie di astinenza il giorno dopo l'intervento, ma è meglio aspettare tre giorni per diminuire l'ipersensibilità post-chirurgica con questa procedura.

Il bracciale dei topi mostra un'allodinia omolaterale per più di due mesi rispetto ai controlli fittizi. Trattamento dei topi con cinque milligrammi per chilogrammo di nortriptilina. Un antidepressivo triciclico due volte al giorno allevia l'allodinia neuropatica dopo circa due settimane di trattamento.

Se il trattamento veniva interrotto, i topi di solito ricadevano in tre o quattro giorni. Questo modello è anche sensibile a un altro trattamento del dolore neuropatico: i Gabapentinoidi. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come scoprire il ramo principale del nervo sciatico nel mize anestetizzato e inserire una copertura attorno ad esso.

In questo modello di dolore neuropatico, il test one fray consente inoltre di valutare le soglie meccaniche e studiare le risposte ai farmaci.