Isolamento de células regenerativas derivadas de adipose para o tratamento da disfunção erétil após a prostatectomia radical

Esta técnica de isolamento pode ser usada para explorar se células-tronco adiposas podem ajudar os pacientes a regenerar a função erétil após a prostatectomia radical. Este método não se limita a uma doença específica. Pode ser usado em todas as áreas de pesquisa de células-tronco adiposas.

As células-tronco isoladas são usadas para tratar a disfunção erétil, mas a técnica de isolamento é um procedimento geral e as células-tronco podem ser úteis em outras áreas dentro da pesquisa de células-tronco. Comece desinfetando a pele do abdômen e do escroto com 0,5% de clorexidina. Use um marcador cirúrgico para elaborar as áreas do abdômen onde a lipoaspiração será realizada, geralmente a área entre a síntese e o umbigo.

Faça duas incisões de seis milímetros de largura na pele do abdômen com um bisturi número 11. Coloque as incisões simetricamente e lateralmente a partir da área de lipoaspiração desenhada. Coloque um pouco de lubrificante sobre as incisões para ter certeza de que a cânula de infiltração desliza para dentro e para fora das incisões facilmente durante a lipoaspiração.

Em seguida, introduza uma cânula de infiltração tamanho 14 através das incisões na pele. Injete solução de Klein modificada subcutânea nas áreas marcadas paralelamente à superfície da pele até que o tecido alvo fique inchado e firme ou tumescente. Injete um volume de solução klein modificada em uma proporção de um para um para o tecido adiposo.

Aguarde 10 minutos para maximizar os efeitos da adrenalina, e reduza a quantidade de sangue no tecido adiposo colhido. Realize uma lipoaspiração padrão de infusão de jato para colher de 200 a 300 milímetros de tecido adiposo. Use cânulas cegas que são ocas com um tubo de infusão integrado e bocal.

Conecte a cânula a um dispositivo de sucção para lipoaspiração. Introduza uma seringa de três milímetros com uma ponta cega através das incisões no abdômen e colete o tecido adiposo no Coletor de Lipo para preservar a lipoaspirata em um ambiente estéril. A lipoaspirata começará a se separar da fase da água.

Use 50 seringas estéreis mililitros para sugar o lipoaspirato do LipoCollector, minimizando o volume de água sugado nas seringas. Enrosque um plugue na ponta das seringas para manter o tecido adiposo estéril. Coloque seringas com ponta para baixo em um saco plástico estéril para iniciar a separação da lipoaspiração da fase da água.

Em seguida, coloque o saco em um recipiente estéril. Cubra o recipiente com uma cortina estéril para proteger o ambiente estéril durante o transporte. Feche as incisões da pele com o material de sutura preferido do cirurgião.

Coloque uma peça de compressão ao redor do abdômen para reduzir o edema pós-operatório. Para fazer um bloco peniano, injete a bupivacaína em dois locais, um colocado ventrally e o outro dorsalmente. Introduza toda a agulha no tecido subcutâneo, apontando-a lateralmente para a direita, e injete a anestesia à medida que a agulha é retraída.

Repita a injeção, apontando a agulha para a esquerda. Coloque todos os consumíveis e enzimas asepticamente sobre a mesa coberta por uma toalha cirúrgica descartável estéril. Limpe o dispositivo com etanol e carregue o conjunto de consumíveis.

Em seguida, conecte um saco de toques lactados ao sistema. Realize a série de testes semiautomáticos antes de adicionar o lipoaspirato. Enquanto o dispositivo estiver sendo preparado, deixe a lipoaspirata ficar em um tubo de 50 mililitros para permitir que a gordura se separe da fase líquida.

Observe a quantidade total de tecido adiposo e use-o para garantir que a quantidade total de gordura carregada estará na faixa da capacidade do dispositivo. Carregue o tecido quando solicitado pelo dispositivo. A máquina vai drenar o excesso de fluido.

Pesar a quantidade de tecido adiposo e lavá-lo com toques lactados. Quando o tecido for lavado e drenado, conecte um novo saco de infusão com ringers lactados de 37 a 39 graus Celsius. Reconstitua a enzima comercialmente disponível contendo colagenase e mistura de protease em cinco mililitros lactados.

Certifique-se de que o dispositivo exibe a quantidade de enzima para injetar no recipiente com o tecido adiposo. Uma vez injetada, a digestão enzimática durará cerca de 20 minutos. Após a digestão do tecido, verifique se o conteúdo é separado em um lipídio superior contendo fase amarela e uma camada rosa inferior que contém as células regenerativas derivadas de adiposos, ou ADRCs.

Deixe a camada rosa drenar para a câmara de processamento celular do conjunto consumível, deixando a camada lipídica para trás. Permita que os ADRCs se concentrem na câmara de processamento celular durante várias rodadas de centrifugação. Em seguida, adicione 10 mililitros de intrabase reconstituídos nos anéis lactados.

A reação enzimática dura 10 minutos e os ADRCs são lavados depois. Quando o isolamento dos ADRCs for concluído, suspenda as células em cinco mililitros do lactato de Ringer e aspire a solução em uma seringa de cinco mililitros. Monte uma trava luer fêmea de galo de três vias na seringa e aspire quatro mililitros de ADRCs em outra seringa estéril de cinco mililitros.

Transfira o último mililitro de ADRCs para uma seringa de um mililitro. Use esta alíquota para análises de caracterização do ADRC, como contagem de células, viabilidade celular, análise de marcadores de superfície por citometria de fluxo e capacidade de diferenciação do ADRC. Coloque uma agulha de calibre 25 na seringa de cinco mililitros contendo os quatro mililitros de ADRCs.

Em seguida, embale-o em uma cortina estéril. Esta solução de ADRCs será injetada no receptor e deve conter, em média, de 8,4 a 32,7 milhões de células. Certifique-se de que a solução de ADRCs permanece homogênea, inclinando a seringa suavemente até que seja injetada no corpora cavernosum.

Coloque uma cortina de abertura sobre o pênis. E um torniquete na raiz do pênis com um laço de silicone. Aperte o laço e fixe-o com fórceps, tornando o torniquete apertado o suficiente para impedir o fluxo sanguíneo do pênis.

Use dois cotonetes antissépticos para desinfetar a pele peniana no local da injeção. Em seguida, injete um mililitro da solução ADRC em um ângulo direto no cavernoso corpora, no lado direito em dois lugares diferentes. Repita este passo no cavernoso corporativo esquerdo, injetando um volume total de quatro mililitros.

Este método foi testado em um ensaio clínico de fase um em 21 homens com idade média de 60 anos e uma ereção normal e vida sexual ativa antes de uma prostatectomia radical. Seis dos homens também sofreram de incontinência. Todos os homens receberam uma única injeção inter cavernosa de ADRCs isolados e foram acompanhados com quatro visitas no ambulatório às 1, 3, 6 e 12 meses após a injeção.

Nenhum evento grave ocorreu durante o momento da observação. Oito homens relataram vermelhidão transitória e inchaço nos locais de injeção, e três relataram reação na área peniana. Oito homens experimentaram eventos reversíveis menores relacionados à lipoaspiração, como desconforto abdominal leve e hematomas abdominais leves.

Nenhum paciente relatou desconforto no acompanhamento de um mês. Sua função sexual foi avaliada com o Índice Internacional de Função Erétil Cinco e o Ereção Dureza. Oito em cada 15 homens do grupo continente relataram que sua função erétil era suficiente para a relação sexual aos 12 meses.

O grupo de seis homens incontinentes não mostrou qualquer melhora da função erétil Ao tentar este protocolo, tenha em mente que as enzimas que são utilizadas durante o procedimento de isolamento devem ser retiradas do freezer ou da geladeira duas horas antes do início do procedimento. Os resultados desta técnica abriram caminho para um RCT onde os efeitos das células-tronco adiposas são explorados em uma escala maior.