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Purificazione della tubulina con modifiche e isotipi posttraslazionali controllati da fonti limitate mediante cicli di polimerizzazione-depolimerizzazione
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Purification of Tubulin with Controlled Posttranslational Modifications and Isotypes from Limited Sources by Polymerization-Depolymerization Cycles
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Purificazione della tubulina con modifiche e isotipi posttraslazionali controllati da fonti limitate mediante cicli di polimerizzazione-depolimerizzazione

DOI:
10.3791/61826-v

•

07:54 min

•

November 05, 2020

•

, , ,
1PSL Research University, CNRS UMR3348,Institut Curie, 2Université Paris-Saclay, CNRS UMR3348,Université Paris Sud

Capitoli

  • 00:05Introduction
  • 00:34Amplification and Lysis of Cells in Suspension Cultures
  • 02:08Amplification and Lysis of Adherent Cells and Mouse Brain Tissue Lysis
  • 03:46Sample Preparation for Analysis
  • 04:10Clarification, Polymerization, and Depolymerization of the Lysate
  • 06:27Evaluation, Quantification, and Characterization of Purified Tubulin
  • 07:19Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Questo protocollo descrive la purificazione della tubulina da fonti di piccole/medie dimensioni come cellule coltivate o cervelli di topo singolo, utilizzando cicli di polimerizzazione e depolimerizzazione. La tubulina purificata è arricchita in specifici isotipi o ha specifiche modifiche posttraslazionali e può essere utilizzata in saggi di ricostituzione in vitro per studiare la dinamica e le interazioni dei microtubuli.

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Keywords: Tubulin PurificationPosttranslational ModificationsIsotypesPolymerization-depolymerization CyclesSuspension CulturesAdherent Cell CulturesCell HarvestingLysis BufferPBS-EDTA

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