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Surveillance des interactions protéine-ligand dans les cellules humaines par RMN quantitative intracellulaire en temps réel à l’aide d’un bioréacteur à haute densité cellulaire
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Chimica
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JoVE Journal Chimica
Monitoring Protein-Ligand Interactions in Human Cells by Real-Time Quantitative In-Cell NMR using a High Cell Density Bioreactor
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Surveillance des interactions protéine-ligand dans les cellules humaines par RMN quantitative intracellulaire en temps réel à l’aide d’un bioréacteur à haute densité cellulaire

DOI:
10.3791/62323-v

•

10:25 min

•

March 09, 2021

•

,
1Magnetic Resonance Center − CERM,University of Florence, 2Consorzio Interuniversitario Risonanze Magnetiche di Metalloproteine − CIRMMP, 3Neurofarba Department,University of Florence

Capitoli

  • 00:05Introduction
  • 00:47Bioreactor Setup
  • 01:34Preparation of the Cell Sample
  • 04:03Bioreactor Operation and NMR Experiments
  • 06:00MCR-ALS Analysis
  • 08:06Results: Monitoring Protein-Ligand Interactions by Real-Time Quantitative In-Cell NMR
  • 09:48Conclusion

Summary

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Ce protocole décrit la configuration d’un bioréacteur RMN pour maintenir les cellules humaines encapsulées viables jusqu’à 72 h, suivie de l’acquisition et de l’analyse de données RMN dans les cellules résolues dans le temps. La méthodologie est appliquée pour surveiller les interactions protéine-ligand intracellulaire en temps réel.

Tags

In-cell NMRProtein-ligand InteractionsHuman CellsBioreactorReal-time MonitoringProtein StructureProtein FunctionConformational ChangesChemical ChangesIsotope LabelingHEK 293T CellsAgarose ThreadsCell EmbeddingFlow UnitNMR TubeTemperature ControlCell ViabilityCell Metabolism

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