인도에 대한 수술 배아 줄기 세포 - 파생 허혈성 hindlimb에 내피 세포가 bioluminescence 이미징에 의해 비침습 추적, 증명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
다리와 발에 산소를 혈액과 영양소를 공급 주변 동맥이 좁아에서 주변 동맥 질환 (PAD) 결과,이 병리 같은 간헐 claudication (도보로 통증), 고통스러운 허혈성 ulcerations, 심지어 사지 위협 괴저와 같은 증상을 초래합니다. 이것은 일반적으로 혈관 내피 모든 혈액과 림프 혈관의 luminal 표면을 투자 내피 세포 monolayer이 혈관 항상성 및 혈관 재생에 지배적인 역할을 것으로 생각됩니다. 그 결과, 내피의 세포 기반의 재생을 막기위한 것이 PAD 치료를위한 유망한 접근법 수 있습니다.
이 비디오에서는, 우리는 배아 줄기 세포 (ESC)의 이식을 보여주 파생 bioluminescence 이미징에 의해 유도 세포 및 생존의 비침습 추적 다음 PAD의 모델로 일방적 hindimb 국소 빈혈의 치료에 대한 내피 세포를. 세포 전달 및 이미징에 대한 구체적인 자료와 절차가 설명됩니다. 이 프로토콜은 니이야마 외 의해 hindlimb 국소 빈혈의 유도를 설명하는 다른 간행물을 준수 1.
프로토콜
1. 내피 세포에 murine ESCs의 분화
- 내피 세포에 ESCs을 차별에 대한 프로토콜은 다른 설명이 프로토콜 2,3의 초점이 아닙니다. 간단히, 세포가 차별 허용, 그리고 CD31 또는 혈관 내피 cadherin (VE - cadherin)로 내피 표시 양성 반응 세포는 다음 형광 활성 세포 분류 (외과)에 의해 정화하고 있습니다.
2. 더블 퓨전 리포터 유전자와 Lentiviral 도입 구축
- Bioluminescence 그러한 반딧불 루시페라제 (fluc)로 기자 유전자의 표현을 수정 세포를 추적하는 데 사용할 수 있습니다. 이 응용 프로그램에 대한 우리의 세포는 내부 ubiquitin 발기인의 통제하에 둘 fluc 및 향상된 녹색 형광 단백질 (eGFP) 융합 유전자가 포함되어 있습니다. 세포를 수정하기 위해, 주요 최적의 유전 요소를 포함하는 transgene lentiviral 벡터가 수행하는 바이오 안전 기준뿐만 아니라 증가 전달의 효율성, fluc - eGFP 퓨전 리포터 유전자를 가지고 우리가 실험실에서 개발된 pFU - FG 벡터는 안정적으로 사용할 수 있습니다 차별화 후 세포를 transduce. 이 융합 구조는 이식 세포의 bioluminescen....
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토론
ESCs 때문에 차별과 내피 세포를 포함한 세 세균 레이어를 구성하는 세포 lineages을 일으키다 능력 그들의 소성의 조직 국소 빈혈의 치료를 위해 유망한 전지 소스입니다. ESCs과 관련된 윤리적 문제를 극복하기 위해 유도 pluripotent 줄기 세포 (iPSCs) 윤리 문제를 극복 대안 pluripotent 줄기 세포 원천 수 있습니다. ESCs 게다가, 이러한 내피 전구 세포 (EPCs) 및 조혈 줄기 세포 (HSCs)와 같은 성인 줄기 세포도 사용할 수 있지만, 이러한 세포 유형 PAD 환자에서 제한된 치료 효과가있을 수 있습니다. 세포의 근육내 배달 법으로서하고 수행하기 위해 간단하고, 전달이 모드는 가용성 요소 또는 plasmids의 전달 의무가 있습니다. 그러나, 대퇴 동맥이나 꼬리 정맥에 vasculature, 체계 전달하기 위해 이식 세포가 쉽게 액세스할 수 있도록 근육내 주사 대신 사용할 수 있습니다.
Bioluminescence 이미징은 세포 생존의 높은 처리량 및 비침습 추적을 수행하는 장점을 제공합니다. 이러한 레이저 .......
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감사의 글
저자 안드레아 액스텔, 사토시 이토, MD, 제프 Velotta, MD, 그랜트 호이트, 로버트 C. 로빈스, MD, 진 유, MD, 팀 도일, 박사, 그리고 기술 지원을위한 스탠포드 작은 동물 이미징 핵심 주셔서 감사합니다. 저자는 또한, 수의 장비의 지원을 오전 비크포드 (주) 감사합니다. 이 연구는 국립 보건원에서 연구 기금 (R01 HL - 75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), 캘리포니아 대학 (15IT - 0257 및 1514RT - 0169)의 캘리포니아 담배 관련 질병 연구 프로그램에 의해 지원되었다 및 재생 의료 (RS1 - 00183)의 캘리포니아 연구소.
NH는 미국 심장 협회에서 친교에 의해 지원됩니다. 심장 협회 수 있습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 수술 도구 | 도구 | Fine Science Tools | ||
| 주사기 바늘 | 도구 | BD Biosciences | 28G 인슐린 주사기 권장 | |
| 인산염 완충 식염수(Phosphate Buffered Saline) | 시약 | Invitrogen | ||
| D-luciferin | 시약 | Biosynth International, Inc | D-luciferin을 PBS에 15 mg/mL 농도로 여과한 스톡 용액으로 미리 준비하십시오 | |
| IVIS 200 생물발광 이미징 시스템 및 획득 소프트웨어 | 장비 |  Xenogen Corporation |
참고문헌
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita,....
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재인쇄 및 허가
