ゼブラフィッシュ胚におけるmRNAおよびモルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチドのマイクロインジェクション。
Summary
マイクロインジェクションは受精ゼブラフィッシュの胚への外来物質を導入するための十分に確立し、効果的な方法です。ここで、我々は、ゼブラフィッシュでのmRNAの過剰発現、およびモルフォリノオリゴヌクレオチドの遺伝子のノックダウンの研究を行うための堅牢なマイクロインジェクション法を示しています。
Abstract
開発中に遺伝子の役割を調査するための不可欠なツールには、遺伝子ノックダウン、過剰発現、およびmisexpressionの研究を実行する機能です。ゼブラフィッシュの（<em>ゼブラフィッシュ</em>）、胚にRNA、DNA、タンパク質、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび他の小分子のマイクロインジェクションは、研究者に遺伝子機能を探索するための迅速かつ堅牢なアッセイを提供する<em> in vivoで</em>。このビデオの記事では、我々は準備して顕微注入する方法を紹介します<em> in vitroで</em>合成されたEGFPのmRNAと翻訳ノンブロッキングモルホリノオリゴに対する<em> PKD2</em>、1細胞期のゼブラフィッシュの胚への常染色体優性多発性嚢胞腎疾患（ADPKD）、に関連する遺伝子。私たちは、その後、GFPの発現と表現型の解析を検証することによってmRNAおよびモルホリノmicroinjectionsの成功を分析する。この技術の広範なアプリケーションが生成するトランスジェニック動物および生殖系列キメラ、細胞運命のマッピングおよび遺伝子のスクリーニングが含まれています。ここに我々は、EGFPとノックダウンのの過剰発現のためのプロトコルを記述する<em> PKD2</em> mRNAとモルフォリノオリゴヌクレオチドを注入して。
Protocol
Discussion
ゼブラフィッシュ胚に微量注入は開発中の特定の遺伝子の役割を探索するための十分に確立し、堅牢なテクニックです。アプリケーションでは、過剰発現、misexpression、および目的の遺伝子だけでなく、複数の遺伝子間のエピスタシスの解析のノックダウンアッセイが含まれています。ゼブラフィッシュのマイクロインジェクションは広くトランスジェニック動物の生成、および初期の胞胚胚…
Acknowledgements
この作品は、ZSにNIHとPKD財団によってサポートされていました。全ての動物実験は、イェール大学動物資源センター（YARC）と動物実験の使用委員会（IACUC）のガイドラインに従って行った。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1x E3 Medium | Reagent | 5 mM NaCl 0.17 mM KCl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 0.1% Methylene blue |
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