Zebrafish 태아의 mRNA와 Morpholino의 안티 센스 Oligonucleotides의 Microinjection.
Summary
Microinjection은 수정된 zebrafish의 배아에 이물질을 소개하는 잘 설립하고 효과적인 방법입니다. 여기, 우리는 강력한 mRNA의 overexpression을 수행하기위한 microinjection 기술 및 zebrafish에서 morpholino의 oligonucleotide 유전자 최저 연구를 보여줍니다.
Abstract
개발하는 동안 유전자의 역할을 조사하는 필수적인 도구가 유전자 최저, overexpression, 그리고 misexpression 연구를 수행하는 능력입니다. zebrafish에서 (<em> Danio rerio</em>), 개발 배아에 RNA, DNA, 단백질, 안티 센스 oligonucleotides와 다른 작은 분자의 microinjection은 연구자에게 유전자 기능을 탐험에 대한 신속하고 강력한 분석을 제공합니다<em> 생체내에</em>. 이 동영상 기사에서는, 우리는 준비하고 microinject하는 방법을 보여줍니다 것입니다<em> 체외에서</em> 합성 EGFP의 mRNA와 translational 차단 morpholino oligo에 대한<em> pkd2</em> 1 – 세포 단계의 배아 zebrafish에 autosomal 지배 polycystic 신장병 (ADPKD)과 관련된 유전자. 우리는 다음 GFP 표현 및 표현형 분석을 확인하여 mRNA 및 morpholino의 microinjections의 성공을 분석합니다. 이 기술의 광범위한 응용 프로그램을 생성하는 유전자 변형 동물 및 세균 라인 chimeras, 세포 – 운명의 매핑 및 유전자 검사를 포함합니다. 여기에 우리의 EGFP와 최저의 overexpression을위한 프로토콜을 설명<em> pkd2</em> mRNA와 morpholino의 oligonucleotide 주입에 의해.
Protocol
Discussion
zebrafish 배아에 Microinjection 개발에서 특정 유전자의 역할을 탐험 잘 설립하고 강력한 기술입니다. 응용 프로그램 overexpression, misexpression와 관심뿐만 아니라 여러 유전자 간의 epistatic 분석의 유전자의 최저의 assays를 포함합니다. zebrafish의 Microinjection은 널리 유전자 변형 동물을 생성하고, 초기 배아 blastula 5,6,7,8,9의 세포 운명을 매핑에 사용되고 있습니다. 또한,이 기법의 응용 프로그램은 ?…
Acknowledgements
이 작품은 ZS에 NIH와 PKD 기초에 의해 지원되었다. 모든 동물 실험은 예일 동물 자원 센터 (YARC) 및 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) 지침에 따라 실시되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1x E3 Medium | Reagent | 5 mM NaCl 0.17 mM KCl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 0.1% Methylene blue |
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