Изготовление Миогенный Engineered Создает тканей
Summary
Здесь мы демонстрируем, изготовление коллагена основе, тканевые конструкции содержащего скелетных миобластов. Эти 3-D инженерных конструкций может быть использован для замены или ремонта тканей<em> В естественных условиях</em>. Для наших целей мы разработали их как атриовентрикулярного электрических каналом для ремонта полной блокадой сердца<sup> [1]</sup>.
Abstract
Несмотря на то, что электронные кардиостимуляторы являются жизненно медицинских приборов, их долгосрочную работу в педиатрической практике может быть проблематичным из-за ограничений, налагаемых небольшой размер ребенка и их неизбежного роста. Следовательно, существует реальная потребность в инновационных терапий, разработанный специально для педиатрических пациентов с нарушения сердечного ритма. Мы полагаем, что проводящие биологические альтернативные, состоящий из коллагена основе матрицы, содержащей autologously клеток, полученных могли лучше адаптироваться к росту, снизить потребность в периодических операций, а также значительно улучшить качество жизни этих пациентов. В настоящем исследовании мы опишем процедуру включения первичных культурах клеток скелетных миобластов в гидрогель матрицы моде хирургически-имплантируемых тканей конструкция, которая будет служить связующим звеном между электрическими верхней и нижней палат сердце. В конечном счете, мы ожидаем, используя этот тип инженерии тканей для восстановления атриовентрикулярного электрической проводимости у детей с полной блокадой сердца. В связи с этим, мы выделяем миобластов из скелетных мышц у новорожденных крыс Льюиса и пластины их на ламинин покрытием культуре ткани блюда с использованием модифицированной версии установленными протоколами<sup> [2, 3]</sup>. После одного-двух дней, культивируемые клетки собираются и смешанные с антибиотиками, 1-го типа коллагена, Матригель ™ и NaHCO<sub> 3</sub>. Результат представляет собой вязкую, единое решение, которое может быть приведен в форму практически любой формы и размера<sup> [1, 4, 5]</sup>. Для наших конструкций ткани, мы используем 1-го типа коллагена изолирован от кожи ягненка плода с использованием стандартных процедур<sup> [6]</sup>. Как только ткань укрепил при 37 ° С, культура СМИ осторожно добавляют к плите, пока построить погружен в воду. Инженерии тканей то разрешено дальнейшее конденсируются через обезвоживания еще на 2 дня, после чего он готов к<em> В пробирке</em> Оценку или хирургической имплантации.
Protocol
Discussion
Формы, в которых ткани строить будут брошены может быть сделано в любой форме и размеру, однако, там должно быть не менее двух точек крепления. В противном случае, матрицы и клетки образуют сферические структуры и клетки погибают. В настоящее время протокол, мы описываем использование п?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа проводится при поддержке грантов от Национального института здоровья (HL068915; HL088206), Новая премия исследователь из Фонда исследований Трэшер и вклад в сердечной фонд Проведение в Детской больнице Бостона.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Silicone tubing | VWR | 60985-724 | ||
| Silicone adhesive | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | ||
| Polyester Mesh | McMaster-Carr | 93185T17 | ||
| Laminin | Sigma | L2020 | ||
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma | N6908 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | ||
| Dispase-2 | Roche | 10295825001 | ||
| Collagenase 2 | Worthington | 46H8863 | ||
| Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G5071 | ||
| 150 mm tissue culture dishes | BD Falcon | 353025 | ||
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | Gibco | 25300 | ||
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | ||
| 7.5% NaHCO3 | Gibco | 25080-094 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 6-well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| 50 mL Conical Vial | BD Falcon | 352098 | ||
| 15 mL Conical Vial | BD Falcon | 352099 | ||
| 0.2 μm filter | Nalgene | 194-2520 |
References
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).
- Blau, H. M., Webster, C. Isolation and characterization of human muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).
- Powell, C. Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy. Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).
- Vandenburgh, H. Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy. Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).
- Gallop, P. M., Seifter, S. Preparation and Properties of Soluble Collagens. Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).
