MİYOJEN Engineered Doku oluşturur imalatı
Summary
Burada, kolajen doku, iskelet matür içeren yapıları imalatı göstermektedir. Bu 3-D mühendislik yapıları dokuların değiştirmek veya onarmak için kullanılan olabilir<em> In vivo</em>. Bizim amaçlarımız için, atriyoventriküler tam kalp bloğu tamiri için bir elektrik iletkeni olarak tasarladık<sup> [1]</sup>.
Abstract
Elektronik kalp pili olduğu gerçeğine rağmen yaşam tasarruf tıbbi cihazlar, pediatrik hastalarda uzun süreli performans bir çocuğun, küçük boyutları ve onların kaçınılmaz büyüme dayattığı kısıtlamaları sorunlu nedeniyle olabilir. Sonuç olarak, kalp ritmi bozuklukları olan pediatrik hastalar için özel olarak tasarlanmış yenilikçi tedaviler için gerçek bir ihtiyaç vardır. Önerdiğimiz içeren bir kolajen bazlı matris oluşan iletken bir biyolojik alternatif hücreler daha iyi, daha büyümeye uyum tekrarlayan ameliyatlar için ihtiyacını azaltır ve büyük ölçüde bu hastalar için yaşam kalitesini artırmak autologously-türetilmiştir. Bu çalışmada, biz moda hidrojel bir matriks içinde kalbin üst ve alt odacıkları arasındaki bir elektrik iletkeni olarak hizmet verecek bir cerrahi implant doku birincil iskelet myoblast hücre kültürleri birleştiren bir yapı için bir prosedür açıklanmaktadır. Sonuçta, biz, tam kalp bloğu olan çocuklar atriyoventriküler elektrik iletim geri yüklemek için bu tür mühendislik doku kullanarak tahmin ediyoruz. Bunun görünümünde matür, yenidoğan Lewis sıçan ve plaka kurulan protokolleri değiştirilmiş bir sürümünü kullanarak laminin kaplı doku kültürü yemekleri üzerine iskelet kasları izole<sup> [2, 3]</sup>. 1-2 gün sonra, kültür hücreleri, antibiyotik ile tip 1 kollajen, Matrigel ™, ve NaHCO toplanır ve karıştırılır<sub> 3</sub>. Sonucu hemen hemen her şekil ve büyüklükte bir kalıp içine dökme edilebilir bir viskoz, düzgün bir çözüm<sup> [1, 4, 5]</sup>. Doku yapıları, tip 1 kollajen standart prosedürler kullanarak fetal kuzu derisi izole istihdam<sup> [6]</sup>. Sonra doku, 37 katılaşmış ° C, yapı suya kadar kültür ortamı dikkatle plaka eklenir. Mühendislik doku daha sonra bunun için hazır olduğunu ve bu noktada, 2 gün daha dehidratasyon ile daha fazla yoğunlaşmaya izin verilir<em> In vitro</em> Değerlendirme veya cerrahi implantasyon.
Protocol
Discussion
Olacağı doku inşa döküm kalıpları, herhangi bir şekil ve boyut olarak yapılabilir, ancak, ek, en az iki puan olması gerekir. Aksi takdirde, matriks ve hücrelerin küresel bir yapı oluştururlar ve hücreleri ölür. Bu protokolde, polyester mesh kullanımı bu amaç için bir tarif, ama biz de başarıyla kullanılan paslanmaz çelik hasır. Açıkçası, büyük kalıplar daha fazla hücre ve diğer malzemelerle daha büyük bir hacim gerektirir. Kalıpları yaparken, kullanılan silikon yapıştırıcı mi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yeni Teşvik Ödülü, Thrasher Araştırma Fonu ve Boston Çocuk Hastanesi'nden Kalp İletim Fonu katkı; Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü'nün araştırma hibeleri (HL088206 HL068915) tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Silicone tubing | VWR | 60985-724 | ||
| Silicone adhesive | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | ||
| Polyester Mesh | McMaster-Carr | 93185T17 | ||
| Laminin | Sigma | L2020 | ||
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma | N6908 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | ||
| Dispase-2 | Roche | 10295825001 | ||
| Collagenase 2 | Worthington | 46H8863 | ||
| Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G5071 | ||
| 150 mm tissue culture dishes | BD Falcon | 353025 | ||
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | Gibco | 25300 | ||
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | ||
| 7.5% NaHCO3 | Gibco | 25080-094 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 6-well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| 50 mL Conical Vial | BD Falcon | 352098 | ||
| 15 mL Conical Vial | BD Falcon | 352099 | ||
| 0.2 μm filter | Nalgene | 194-2520 |
References
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).
- Blau, H. M., Webster, C. Isolation and characterization of human muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).
- Powell, C. Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy. Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).
- Vandenburgh, H. Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy. Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).
- Gallop, P. M., Seifter, S. Preparation and Properties of Soluble Collagens. Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).
