המצאה של Myogenic בונה רקמות מהונדסות
Summary
הנה, אנחנו מדגימים ייצור של קולגן מבוסס, רקמה בונה המכיל myoblasts השלד. 3-D אלה בונה מהונדסים עשויים לשמש כדי להחליף או לתקן רקמות<em> In vivo</em>. לענייננו, יש לנו תוכנן אלה כצינור חשמלי החדרים והעליות לתיקון של גוש בלב שלם<sup> [1]</sup>.
Abstract
למרות העובדה כי קוצבי אלקטרוניים הם מצילי חיים מכשור רפואי, ביצועים לטווח ארוך שלהם מטופלים ילדים יכול להיות בעייתי בשל מגבלות שהוטלו על ידי גודלו הקטן של הילד הצמיחה הבלתי נמנעת שלהם. כתוצאה מכך, קיים צורך אמיתי עבור טיפולים חדשניים שעוצבו במיוחד עבור מטופלים ילדים עם הפרעות קצב לב. אנו מציעים אלטרנטיבה ביולוגית מוליך המורכב מטריצה מבוסס קולגן המכיל autologously הנגזרות תאים יכול להתאים טוב יותר לצמיחה, להפחית את הצורך בניתוחים חוזרים, וגם לשפר באופן משמעותי את איכות החיים של חולים אלו. במחקר הנוכחי, אנו מתארים תהליך לשילוב העיקרי שלד התא תרבויות myoblast בתוך מטריצה הידרוג לאופנה מבנה הרקמה בניתוח מושתלת אשר ישמש כצינור חשמלי בין לתאי העליון והתחתון של הלב. בסופו של דבר, אנו צופים באמצעות סוג זה של רקמות מהונדסות כדי לשחזר הולכה חשמלית בין העליות והחדרים בילדים עם חסם לב מלא. לאור זאת, אנו לבודד myoblasts מן שרירי השלד של הילוד חולדות לואיס אותם על צלחת laminin מצופה תרבות מנות רקמות באמצעות גירסה שונה של פרוטוקולים הוקמה<sup> [2, 3]</sup>. לאחר 1-2 ימים, תאים בתרבית נאספים ומעורבבים עם אנטיביוטיקה, קולגן סוג 1, Matrigel ™, NaHCO<sub> 3</sub>. התוצאה היא פתרון צמיגה, אחיד שניתן יצוקה לתוך תבנית של צורה כמעט וגודל<sup> [1, 4, 5]</sup>. עבור בונה רקמת שלנו, אנו מעסיקים מסוג 1 קולגן מבודד עור כבש העובר באמצעות נהלים סטנדרטיים<sup> [6]</sup>. לאחר רקמה יש הקרושה ב 37 ° C, תרבות התקשורת הוא הוסיף בזהירות לצלחת עד לבניית הוא שקוע. רקמות מהונדסות מותר אז לרכז עוד דרך התייבשות עבור 2 ימים נוספים, ובשלב זה מוכן<em> במבחנה</em> הערכה או כירורגי-ההשתלה.
Protocol
Discussion
תבניות בו לבנות רקמות יהיה יצוק יכול להתבצע בכל צורה וגודל, אולם יש צורך לפחות בשתי נקודות של הקובץ המצורף. אחרת, המטריצה ותאי ליצור מבנה כדורי והתאים מתים. בפרוטוקול הנוכחי, אנו מתארים את השימוש של רשת פוליאסטר למטרה זו, אך יש לנו גם השתמשו בהצלחה רשת נירוסטה. ברור,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכת על ידי מענקי מחקר מן המכון הלאומי לבריאות (HL068915; HL088206), פרס ניו חוקר מהקרן לחקר Thrasher, ותרומות לקרן הולכה לב בבית החולים לילדים בבוסטון.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Silicone tubing | VWR | 60985-724 | ||
| Silicone adhesive | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | ||
| Polyester Mesh | McMaster-Carr | 93185T17 | ||
| Laminin | Sigma | L2020 | ||
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma | N6908 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | ||
| Dispase-2 | Roche | 10295825001 | ||
| Collagenase 2 | Worthington | 46H8863 | ||
| Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G5071 | ||
| 150 mm tissue culture dishes | BD Falcon | 353025 | ||
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | Gibco | 25300 | ||
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | ||
| 7.5% NaHCO3 | Gibco | 25080-094 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 6-well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| 50 mL Conical Vial | BD Falcon | 352098 | ||
| 15 mL Conical Vial | BD Falcon | 352099 | ||
| 0.2 μm filter | Nalgene | 194-2520 |
References
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).
- Blau, H. M., Webster, C. Isolation and characterization of human muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).
- Powell, C. Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy. Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).
- Vandenburgh, H. Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy. Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).
- Gallop, P. M., Seifter, S. Preparation and Properties of Soluble Collagens. Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).
