Myogenic इंजीनियर ऊतक constructs का निर्माण
Summary
यहाँ, हम कोलेजन आधारित है, ऊतक कंकाल myoblasts युक्त constructs के निर्माण को प्रदर्शित करता है. ये 3 – डी इंजीनियर constructs जगह या ऊतकों की मरम्मत के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है<em> Vivo में</em>. हमारे प्रयोजनों के लिए, हम पूरा दिल ब्लॉक की मरम्मत के लिए एक atrioventricular विद्युत नाली के रूप में इन डिजाइन किया गया है<sup> [1]</sup>.
Abstract
तथ्य यह है कि इलेक्ट्रॉनिक पेसमेकर के बावजूद जीवन बचत चिकित्सा उपकरणों, उनके बाल चिकित्सा रोगियों में लंबी अवधि के प्रदर्शन में एक बच्चे के छोटे आकार और उनके अपरिहार्य वृद्धि द्वारा लगाए गए प्रतिबंधों के लिए समस्याग्रस्त कारण हो सकते हैं. नतीजतन, वहाँ अभिनव कार्डियक ताल विकारों के साथ बाल चिकित्सा रोगियों के लिए विशेष रूप से डिजाइन उपचार के लिए एक वास्तविक जरूरत है. हम प्रस्ताव है कि एक प्रवाहकीय जैविक एक कोलेजन आधारित युक्त मैट्रिक्स से मिलकर वैकल्पिक autologously व्युत्पन्न कोशिकाओं को बेहतर विकास के लिए अनुकूल है, आवर्तक सर्जरी के लिए की जरूरत को कम सकता है, और बहुत इन रोगियों के लिए जीवन की गुणवत्ता में सुधार. वर्तमान अध्ययन में, हम एक hydrogel मैट्रिक्स के भीतर प्राथमिक कंकाल myoblast सेल संस्कृतियों को शामिल फैशन के लिए एक शल्य चिकित्सा प्रत्यारोपण ऊतकों का निर्माण है कि दिल के ऊपरी और निचले कक्षों के बीच एक विद्युत नाली के रूप में काम करेगा करने के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन. अंततः, हम इंजीनियर ऊतक के इस प्रकार का उपयोग कर पूरा दिल ब्लॉक के साथ बच्चों में atrioventricular विद्युत प्रवाहकत्त्व को बहाल करने की आशा. उस के ध्यान में रखते हुए, हम नवजात चूहों लुईस और उन्हें को laminin लेपित टिशू कल्चर स्थापित प्रोटोकॉल का एक संशोधित संस्करण का उपयोग व्यंजन पर थाली के कंकाल की मांसपेशियों से myoblasts अलग<sup> [2, 3]</sup>. एक को दो दिनों के बाद, संवर्धित कोशिकाओं एकत्र कर रहे हैं और मिश्रित एंटीबायोटिक दवाओं के साथ, टाइप 1 कोलेजन, Matrigel ™, और NaHCO<sub> 3</sub>. परिणाम एक चिपचिपा, वर्दी समाधान है कि लगभग किसी भी आकार और आकार के एक साँचे में ढालना में डाली जा सकता है<sup> [1, 4, 5]</sup>. हमारे ऊतक constructs के लिए, हम टाइप 1 भ्रूण भेड़ के बच्चे मानक प्रक्रियाओं का उपयोग कर त्वचा से अलग कोलेजन को रोजगार<sup> [6]</sup>. एक बार में 37 ऊतक पर जम गया है ° सी, संस्कृति मीडिया ध्यान थाली करने के लिए जोड़ा है जब तक का निर्माण जलमग्न है. ऊतक इंजीनियर तो अधिक 2 दिनों के लिए निर्जलीकरण के माध्यम से आगे गाढ़ा करने के लिए अनुमति दी है, पर जो बात इसके लिए तैयार है<em> इन विट्रो में</em> मूल्यांकन या शल्य चिकित्सा के आरोपण.
Protocol
Discussion
नए नए साँचे में जो ऊतकों का निर्माण डाली जाएगा किसी भी आकार और आकार में बनाया जा सकता है है, तथापि, वहाँ करने के लिए अनुलग्नक के कम से कम दो अंक की जरूरत है. अन्यथा, मैट्रिक्स कोशिकाओं और एक गोलाकार संरचना ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
, गाहनेवाला रिसर्च फंड से एक नई शोधक पुरस्कार, और बच्चों के अस्पताल के बोस्टन में हृदय चालन फंड के लिए योगदान, इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों से अनुसंधान अनुदान (HL088206 HL068915) द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Silicone tubing | VWR | 60985-724 | ||
| Silicone adhesive | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | ||
| Polyester Mesh | McMaster-Carr | 93185T17 | ||
| Laminin | Sigma | L2020 | ||
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma | N6908 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | ||
| Dispase-2 | Roche | 10295825001 | ||
| Collagenase 2 | Worthington | 46H8863 | ||
| Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G5071 | ||
| 150 mm tissue culture dishes | BD Falcon | 353025 | ||
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | Gibco | 25300 | ||
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | ||
| 7.5% NaHCO3 | Gibco | 25080-094 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 6-well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| 50 mL Conical Vial | BD Falcon | 352098 | ||
| 15 mL Conical Vial | BD Falcon | 352099 | ||
| 0.2 μm filter | Nalgene | 194-2520 |
References
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).
- Blau, H. M., Webster, C. Isolation and characterization of human muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).
- Powell, C. Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy. Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).
- Vandenburgh, H. Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy. Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).
- Gallop, P. M., Seifter, S. Preparation and Properties of Soluble Collagens. Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).
