الرجعية المدارية في حقن اسماك الزرد الكبار
Summary
هنا نبين كيفية القيام الرجعية المدارية الحقن في الزرد الكبار.
Abstract
العلاج من تعاطي المخدرات من الحيوانات كله هو أداة أساسية في أي نظام نموذجي للدراسات الجينية الدوائية والكيميائية. الوريد (IV) الحقن وغالبا ما يكون الوسيلة الأكثر فعالية وموسع للتسليم وكيلا للاهتمام. في الزرد (<em> دانيو rerio</em>) ، وقد تم حقن المخدرات الرابع لفترة طويلة تحديا بسبب اوعية صغيرة. وقد أثبت هذا أيضا عقبة كبيرة لحقن الخلايا hematopoeitic خلال زرع الخلايا الجذعية. تاريخيا ، كان يتم الحقن إلى مجرى الدم مباشرة من خلال القلب. ومع ذلك ، فإن هذا الإجراء داخل القلب ومعدل وفيات عالية جدا في كثير من الأحيان كما هو ثقب القلب أثناء الحقن ترك الأسماك معرضة لل، وعدوى فقدان كميات هائلة من الدم أو مميتة في تلفها. بالاعتماد على خبرتنا مع الماوس ، قمنا بتطوير إجراء الحقن الجديدة في الزرد في موقع الحقن التي تقف وراء العين والجيوب الوريدية في الرجعية المداري. لقد كان هذا الرجعية المدارية تقنية الحقن (ريال عماني) يعمل بنجاح في كل من حقن المخدرات في السمك الكبار فضلا عن زرع خلايا نخاع كله الكلى. ريال عماني حقن يبلغ معدل وفيات أقل بكثير من الحقن داخل القلب التقليدية. الأسماك التي يتم حقنها الرجعية orbitally تميل إلى حقن أقل تنزف التالية وهي في خطر أقل بكثير من إصابة أحد الأجهزة الرئيسية مثل القلب. خلايا أخرى ، عندما يقوم بشكل صحيح ، حقن و / أو المخدرات تدخل بسرعة في مجرى الدم مما يسمح مركبات لممارسة تأثيرها على الأسماك الكاملة وخلايا الكلى بسهولة المنزل لمكانها المناسب. وبالتالي ، فإن هذه تقنية الحقن يقلل من وفيات جديدة في الوقت الذي تسمح كفاءة في توفير المواد في مجرى الدم من السمك الكبار. نحن هنا مثالا على هذه التقنية من قبل الرجعية المدارية حقن تيراغرام (<em> غلوبين</em> : GFP) الخلايا في البالغين<em> كاسبر</em> الأسماك وكذلك حقن صبغة الفلورسنت الأحمر (دكستران ، تكساس الأحمر<em></em>) في البالغين<em> كاسبر</em> الأسماك. نحن تصور ثم حقن الحيوان كلها ناجحة المجهري مضان.
Protocol
Discussion
الرجعية المدارية الحقن في الزرد الكبار يعطي أعلى كفاءة تسليم المواد الى مجرى الدم حقن مع أدنى معدل للوفيات. نظرا لطبيعة المكان الحقن ، وثقب ويبدو أن تلتئم بسرعة ، والحد من حدوث العدوى وكمية من فقدان الدم. بل قد تكون في موقع حقن مرارا خلال فترة زمنية قصيرة لحقن يومية من…
Acknowledgements
ويؤيد هذا العمل من قبل معهد هوارد هيوز الطبي ومنحة من المعاهد الوطنية للصحة لدراسة تكون الدم الجنيني.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M. A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).
- White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis. Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).
- LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish. J. Vis. Exp. , (2007).
