Retro-orbitale injectie in Adult zebravis
Summary
Hier laten we zien hoe retro-orbitale injectie te doen in volwassen zebravissen.
Abstract
Medicamenteuze behandeling van hele dieren is een essentieel instrument in een modelsysteem voor farmacologische en chemische genetische studies. Intraveneuze (IV) injectie is vaak de meest effectieve en niet-invasieve vorm van levering van een agent van belang. Bij de zebravis (<em> Danio rerio</em>), Is intraveneuze injectie van drugs al lang een uitdaging vanwege de kleine bloedvaten. Dit heeft ook bewezen een belangrijke hindernis voor de injectie van de cellen tijdens hematopoeitic stamceltransplantatie. Historisch gezien werden injecties in de bloedbaan direct uitgevoerd via het hart. Echter, deze intra-cardiale procedure heeft een zeer hoog sterftecijfer als het hart is vaak doorboord tijdens de injectie het verlaten van de vissen vatbaar voor infecties, massaal bloedverlies of fatale schade aan organen. Op basis van onze ervaring met de muis, hebben we een nieuwe injectie procedure in de zebravis, waarin de plaats van injectie is achter het oog en in de retro-orbitale veneuze sinus. Deze retro-orbitale (RO) injectie-techniek is met succes toegepast in zowel de injectie van drugs in de volwassen vissen als de transplantatie van nieren gehele beenmerg cellen. RO injectie heeft een veel lager sterftecijfer dan de traditionele intra-cardiale injectie. Vissen die retro-orbitaal ingespoten hebben de neiging om minder bloeden na de injectie en zijn op een veel lager risico op letsel van een belangrijk orgaan als het hart. Verder, mits goed uitgevoerd, geïnjecteerde cellen en / of drugs snel in de bloedbaan waardoor verbindingen om hun effect hebben op de hele vis en de niercellen om naar huis te gemakkelijk aan hun niche. Zo werd deze nieuwe injectietechniek minimaliseert sterfte terwijl efficiënte levering van materiaal in de bloedbaan van volwassen vis. Hier hebben we illustreren deze techniek door retro-orbitale injectie van Tg (<em> Globine</em>: GFP) cellen in volwassen<em> Casper</em> Vis en de injectie van een rood fluorescerende kleurstof (dextraan, Texas Red<em></em>) Tot volwassen<em> Casper</em> Vis. Vervolgens hebben we visualiseren een succesvolle injecties door de hele dier fluorescentie microscopie.
Protocol
Discussion
Retro-orbitale injectie in volwassen zebravissen geeft het hoogste rendement van de levering van het geïnjecteerde materiaal naar de bloedbaan met de laagste incidentie van mortaliteit. Vanwege de aard van de injectie plek, het lek lijkt te snel te genezen, het verminderen van het voorkomen van besmetting en de hoeveelheid bloedverlies. De site kan zelfs meerdere malen geïnjecteerd worden gedurende een korte tijd voor de dagelijkse injecties met medicijnen, bijvoorbeeld.
Grote hoeveelheden…
Acknowledgements
Dit werk wordt ondersteund door Howard Hughes Medical Institute en een subsidie van de NIH voor de studie van de embryonale hematopoiese.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M. A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).
- White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis. Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).
- LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish. J. Vis. Exp. , (2007).
