רטרו מסלולית הזרקה של דג הזברה למבוגרים
Summary
כאן אנחנו מראים איך לעשות רטרו מסלולית הזרקת דג הזברה מבוגר.
Abstract
טיפול תרופתי של בעלי חיים שלמים היא כלי חיוני בכל מערכת מודל מחקרים גנטיים תרופתי כימי. תוך ורידי (IV) הזרקה היא לעתים קרובות בצורה היעילה ביותר פולשנית המסירה של סוכן של עניין. בשנת דג הזברה (<em> Danio rerio</em>), הזרקה של תרופות IV כבר זמן רב אתגר בגלל קוטר כלי שיט קטנים. זו הוכיחה גם משוכה משמעותית עבור הזרקה של תאים במהלך השתלת תא גזע hematopoeitic. מבחינה היסטורית, זריקות לתוך זרם הדם נעשו ישירות דרך הלב. עם זאת, הליך זה תוך לב יש שיעור תמותה גבוה מאוד כמו הלב הוא ניקב לעתים קרובות במהלך ההזרקה עוזב את הדג נוטה, אובדן דם מסיבי זיהום או נזק איבר קטלנית. בהסתמך על הניסיון שלנו עם העכבר, פיתחנו נוהל הזרקה חדשים דג הזברה שבו ההזרקה עומד מאחורי העין לתוך הסינוס רטרו מסלולית ורידי. רטרו מסלולית זו (RO) טכניקת ההזרקה הועסק בהצלחה הזריקה שתי תרופות הדגים הבוגרים וכן השתלה של תאים במח כל כליה. הזרקת RO יש שיעור תמותה נמוך בהרבה מאשר הזרקה תוך הלב המסורתית. דגים כי הם הזריקו רטרו orbitally נוטים לדמם לאחר הזרקה פחות נמצאים בסיכון נמוך הרבה יותר של פגיעה באיבר גדול כמו הלב. תאים נוספים, כאשר היא מבוצעת כהלכה, הזריק ו / או תרופות במהירות ולהיכנס למחזור הדם ומאפשר תרכובות להפעיל השפעתם על הדג שלם ותאי הכליה בקלות הביתה הנישה שלהם. לכן, בטכניקה זו זריקה חדש ממזער תמותה תוך מתן אפשרות אספקה יעילה של החומר לתוך מחזור הדם של הדגים הבוגרים. כאן אנו מדגימים את הטכניקה הזו על ידי הזרקת רטרו ההקפה של Tg (<em> גלובין</em>: GFP) לתוך תאים בוגרים<em> קספר</em> דגים כמו גם זריקת צבע פלואורסצנטי אדום (dextran, טקסס האדום<em></em>) לתוך מבוגר<em> קספר</em> דגים. לאחר מכן, אנו לדמיין זריקות מוצלחת על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי חיים שלמים.
Protocol
Discussion
רטרו מסלולית הזרקת דג הזברה מבוגר נותן את היעילות הגבוהה ביותר של מסירת החומר מוזרק לזרם הדם עם השכיחות הנמוכה ביותר של תמותה. בשל אופיו של המקום הזרקה, לנקב מופיע לרפא במהירות, להקטין את המופע של זיהום כמות איבוד הדם. האתר עשוי אפילו להיות מוזרק שוב ושוב במהלך פרק זמן…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכת על ידי הווארד יוז רפואי מכון מענק מ-NIH לחקר hematopoiesis עובריים.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M. A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).
- White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis. Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).
- LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish. J. Vis. Exp. , (2007).
