वयस्क Zebrafish में इंजेक्शन रेट्रो - कक्षीय
Summary
हम यहाँ दिखाने के लिए कैसे करने के लिए वयस्क zebrafish में रेट्रो – कक्षीय इंजेक्शन.
Abstract
पूरी पशुओं के औषध उपचार औषधीय और रासायनिक आनुवंशिक अध्ययन के लिए किसी भी मॉडल प्रणाली में एक अनिवार्य उपकरण है. अंतःशिरा इंजेक्शन (चतुर्थ) अक्सर ब्याज की एक एजेंट के वितरण का सबसे प्रभावी और noninvasive फार्म है. (Zebrafish में<em> Danio rerio</em>), चतुर्थ दवाओं के इंजेक्शन छोटे पोत व्यास की वजह से लंबे समय से एक चुनौती रहा है. यह भी hematopoeitic स्टेम कोशिका प्रत्यारोपण के दौरान कोशिकाओं के इंजेक्शन के लिए एक महत्वपूर्ण बाधा साबित कर दिया है. ऐतिहासिक, खून में इंजेक्शन सीधे दिल के माध्यम से किया गया था. हालांकि, इस अंतर हृदय प्रक्रिया एक बहुत ही उच्च मृत्यु दर है के रूप में दिल अक्सर संक्रमण, बड़े पैमाने पर खून की कमी या घातक अंग क्षति ग्रस्त मछली छोड़ने के इंजेक्शन के दौरान पंचर है. माउस के साथ हमारे अनुभव पर आकर्षित, हम zebrafish इंजेक्शन साइट में जो आँख के पीछे और रेट्रो – कक्षीय शिरापरक साइनस में में एक नया इंजेक्शन प्रक्रिया विकसित किया है. यह रेट्रो कक्षीय इंजेक्शन (आरओ) तकनीक को सफलतापूर्वक किया गया है दोनों वयस्क मछली में दवाओं के इंजेक्शन के रूप में अच्छी तरह के रूप में पूरे गुर्दे मज्जा की कोशिकाओं के प्रत्यारोपण में कार्यरत हैं. आरओ इंजेक्शन एक बहुत कम अंतर हृदय पारंपरिक इंजेक्शन की तुलना में मृत्यु दर है. मछली है कि रेट्रो orbitally इंजेक्ट कर रहे हैं कम निम्नलिखित इंजेक्शन खून करते हैं और एक बहुत कम चोट के दिल की तरह एक प्रमुख अंग करने के लिए जोखिम में हैं. इसके अलावा, जब ठीक से प्रदर्शन इंजेक्शन, कोशिकाओं और / या ड्रग्स जल्दी खून में प्रवेश यौगिकों पूरे मछली और गुर्दे की कोशिकाओं पर उनके प्रभाव डालती करने के लिए अपने आला के लिए घर आसानी से की अनुमति. इस प्रकार, इस नए इंजेक्शन तकनीक मृत्यु दर कम से कम है, जबकि वयस्क मछली के खून में सामग्री के कुशल वितरण की अनुमति है. यहाँ हम टीजी के रेट्रो – कक्षीय इंजेक्शन द्वारा इस तकनीक के उदाहरण देना (<em> ग्लोबिन</em>: वयस्क में GFP) कोशिकाओं<em> कैस्पर</em> मछली के रूप में अच्छी तरह के रूप में एक लाल फ्लोरोसेंट डाई के इंजेक्शन (dextran, टेक्सास रेड<em></em>) वयस्क में<em> कैस्पर</em> मछली. हम तो पूरे जानवर प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा सफल इंजेक्शन कल्पना.
Protocol
Discussion
रेट्रो – कक्षीय वयस्क zebrafish में इंजेक्शन मृत्यु दर के कम घटना के साथ खून इंजेक्शन सामग्री की डिलीवरी की उच्चतम क्षमता देता है. इंजेक्शन मौके की प्रकृति के कारण, पंचर करने के लिए जल्दी ठीक है, संक्रमण और रक?…
Acknowledgements
इस काम के हॉवर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट और भ्रूण hematopoiesis के अध्ययन के लिए NIH से एक अनुदान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
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