アダルトゼブラフィッシュにおける眼窩インジェクション
Summary
ここでは、成人のゼブラフィッシュで眼窩の注入を行う方法を示しています。
Abstract
動物全体の薬物治療は、薬理学的および化学的遺伝学的研究の任意のモデルシステムに不可欠なツールです。静脈内（IV）注射は、多くの場合、関心のエージェントの配信の最も効果的かつ非侵襲的なフォームです。ゼブラフィッシュの（<em>ゼブラフィッシュ</em>）、薬物の静脈内注入は長いので、小血管の直径の課題でした。これはまた、造血幹細胞移植時の細胞の注入のための重要なハードルを証明している。歴史的に、血流への注射は、心臓から直接行われた。心がしばしば感染、大量の失血または致命的な臓器の損傷を受けやすい魚を残して注入時の穿刺しかし、この内心臓手術は、非常に高い死亡率を持っています。マウスを使って私たちの経験を生かし、我々は、注射部位は、目の後ろと後眼窩静脈洞になっているゼブラフィッシュの新しい注入の手順を開発しました。この眼窩（RO）の注入法は、正常に成魚の薬の注入だけでなく、全体の腎臓の骨髄細胞の移植の両方で採用されている。 ROの注入は、従来の内心臓注射よりもはるかに低い死亡率を持っています。眼窩に注入されている魚は少なく、次の注入を出血する傾向があり、心臓などの主要な臓器に傷害の非常に低い危険にさらされている。さらに、適切に実行したとき、注入された細胞および/または薬物を迅速化合物は、そのニッチに簡単にホームに全体の魚と腎臓の細胞に対する効果を発揮できるように血流に入る。大人の魚の血流に材料の効率的な配信を可能にしながらこのように、この新しい注入法は、死亡率を最小限に抑えます。ここでは、Tgの眼窩注入することにより、この手法を例示する（<em>グロビン</em>：大人にGFP）細胞<em>キャスパー</em>魚だけでなく、赤色蛍光色素の注入（デキストラン、テキサスレッド<em></em>）成人に<em>キャスパー</em>魚。私たちは、その後、全体の動物の蛍光顕微鏡で成功した注射を可視化する。
Protocol
Discussion
成人ゼブラフィッシュにおける眼窩注入は死亡率の最も低い発生率と血流に注入された材料の納入の最高効率が得られます。ために注射スポットの性質上、穿刺は感染症と失血の量の発生を減少させる、迅速に治癒に表示されます。サイトであっても繰り返して、例えば、薬物の毎日注射するための短い時間の間に注入されることがあります。
薬物の大量は、単純に浸?…
Acknowledgements
この作品はハワードヒューズ医学研究所と胚造血の研究のためのNIHからの助成金によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
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