성인 Zebrafish에서 레트로 - 궤도 분사
Summary
여기 우리는 성인 zebrafish에서 역전사 궤도 주사를하는 방법을 보여줍니다.
Abstract
전체 동물의 약물 치료 약리 화학 유전 연구에 대한 모델 시스템에 필수적인 도구입니다. 정맥 주사 (IV) 주사가 종종 관심의 대리인의 전달의 가장 효과적이고 비침 투 형태입니다. zebrafish에서 (<em> Danio rerio</em>), 약물의 IV 주입 길이 때문에 작은 혈관 직경의 도전을했습니다. 이것은 또한 hematopoeitic 줄기 세포 이식하는 동안 세포의 주입을위한 중요한 장애물을 입증했다. 역사적으로, 혈류로 주사는 심장을 통해 직접 수행했다. 심장이 자주 감염, 과다 출혈이나 치명적인 장기 손상하는 경향이 물고기를 떠나 주입하는 동안 구멍이다 그러나,이 내부 심장 절차는 매우 높은 사망률이 있습니다. 마우스로 우리의 경험에 그리기, 우리는 사출 사이트가 눈 뒤에과 복고풍 – 궤도 정맥 부비동에있는 zebrafish의 새로운 주사 절차를 개발했습니다. 이 역 – 궤도 (RO) 사출 기술은 성공적으로 성인 물고기에서 약물 주입뿐만 아니라 전체 신장 골수 세포의 이식 모두에 채용되었습니다. RO 주입은 전통적인 내부 심장 주사보다 훨씬 낮은 사망률이 있습니다. 복고풍 – orbitally 주입 물고기 적은 다음과 같은 주사를 출혈하는 경향이 있고 심장과 같은 주요 장기에 부상의 훨씬 더 낮은 위험에 처해질 수 있습니다. 또한, 정상적으로 수행하면, 주입된 세포 및 / 또는 약물 빠르게 화합물들이 틈새 시장을 집에서 쉽게 전체 생선과 신장의 세포를 그들의 효과를 발휘 수 있도록 혈류를 입력합니다. 성인 물고기의 혈류로 재료의 효율적인 전송을 허용하는 동안 따라서,이 새로운 사출 기술은 사망률을 최소화합니다. 여기 TG의 역전사 궤도 주입하여이 기술을 예시 (<em> globin</em> 성인에 GFP) 전지<em> 캐스퍼</em> 생선뿐만 아니라 적색 형광 색소의 주입 (dextran, 텍사스 레드<em></em>) 성인에<em> 캐스퍼</em> 물고기. 그러면 모든 동물의 형광 현미경에 의해 성공적으로 주사를 시각화.
Protocol
Discussion
성인 zebrafish에서 레트로 – 궤도 분사는 사망률의 가장 낮은 발병률과 혈류에 주입 물질의 전달 가장 높은 효율을 제공합니다. 때문에 분사 지점의 성격, 주사 감염과 혈액 손실 금액의 발생을 감소 신속하게 치유가 나타납니다. 사이트도 반복 예를 들어, 약물의 매일 주사를위한 짧은 시간 동안 주입 수 있습니다.
약물의 다량은 간단하게 포장되어과 관심의 약물을 포함하는 …
Acknowledgements
이 작품은 하워드 휴즈 의학 연구소와 배아 조혈 연구에 대한 NIH에서 교부금에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
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