Retro-orbital de injeção no Zebrafish Adulto

Summary

Aqui nós mostramos como fazer retro-orbital injeção em peixe-zebra adulto.

Abstract

Tratamento medicamentoso de animais inteiros é uma ferramenta essencial em qualquer sistema modelo para farmacológicos e químicos estudos genéticos. Injecção intravenosa (IV) é muitas vezes a forma mais eficaz e não invasivo de transporte de um agente de interesse. No peixe-zebra (<em> Danio rerio</em>), IV injeção de drogas tem sido um desafio, porque o diâmetro dos pequenos vasos. Esta também se mostrou um obstáculo significativo para a injeção de células durante o transplante de células-tronco hematopoética. Historicamente, as injeções para a corrente sanguínea foram feitas diretamente através do coração. No entanto, este procedimento intra-cardíaca tem uma taxa de mortalidade muito elevada como o coração é freqüentemente furado durante a injeção de deixar o peixe propensos à infecção perda de sangue, maciça ou lesão de órgão fatal. Com base na nossa experiência com o mouse, temos desenvolvido um procedimento de injeção novo no zebrafish em que o local da injeção é atrás do olho e no seio venoso retro-orbital. Este retro-orbital técnica de injeção (RO) tem sido empregada com sucesso em ambos injeção de drogas nos peixes adultos, bem como o transplante de células da medula todo rim. Injeção RO tem uma taxa de mortalidade muito menor do que a injeção intra-cardíaca tradicional. Peixes que são injetados retro-orbital tendem a sangrar a injeção menos seguinte e estão em um risco muito menor de lesão de um órgão importante como o coração. Células Além disso, quando realizado adequadamente, injetado e / ou drogas entrar rapidamente na corrente sangüínea permitindo compostos para exercer seu efeito sobre o peixe inteiro e células de rim facilmente o lar de seu nicho. Assim, esta técnica minimiza nova injeção de mortalidade, permitindo a entrega eficiente de material para a corrente sanguínea de peixes adultos. Aqui nós exemplificar essa técnica, retro-orbital injeção de Tg (<em> Globina</em>: GFP) em células adultas<em> Casper</em> Peixes, bem como a injeção de um corante fluorescente vermelho (dextran, Texas Red<em></em>) Em adultos<em> Casper</emPeixe>. Em seguida, visualize injeções de sucesso por microscopia de fluorescência toda animais.

Protocol

Parte 1. Preparação de material de injecção Tg (globina: GFP) células: Sangrar peixes doadores adultos usando ponteira 10ul revestido em heparina (1unit/ul) para pescar punção por trás de emalhar. Aspirar glóbulos vermelhos e dispensar em tampão celular (0.9x PBS + 5% de SFB + 1% Pen / Strep). Suspensão de células filtro sobre malha 40uM e determinar a concentração de células usando hemocitômetro como descrito por LeBlanc et al. Spin down e ress…

Discussion

Retro-orbital injeção em peixe-zebra adulto dá a maior eficiência de entrega de material injetado na corrente sanguínea com a menor incidência de mortalidade. Devido à natureza do local de injeção, a punção parece curar rapidamente, diminuindo a ocorrência de infecção e da quantidade de perda de sangue. O site pode até ser injetado repetidamente durante um curto período de tempo para injeções diárias de medicamentos, por exemplo.

Grandes quantidades de droga deve ser compr…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa		Sigma-Aldrich	2106	Preweighed vial of 300 USP units
Tricaine-S		Western Chemical		MS-222
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline		Invitrogen	14190-144
Dextran, Texas Red®		Molecular Probes Inc.	D1830
E3				5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2
Microliter Syringe		Hamilton	80300	701N 10uL SYR (26s/2”/2)