Ретро-орбитальный инъекций у взрослых данио рерио
Summary
Здесь мы показываем, как это сделать ретро-орбиту у взрослых рыбок данио.
Abstract
Медикаментозное лечение целых животных является важным инструментом в любой модели системы для фармакологической и химической генетических исследований. Внутривенно (IV) инъекции часто является наиболее эффективным и неинвазивной формой доставки агентов, представляющих интерес. В данио (<em> Danio rerio</em>), И. В. инъекции препаратов уже давно проблемой из-за малого диаметра сосуда. Это также оказалось значительным препятствием для инъекции клеток в процессе hematopoeitic трансплантации стволовых клеток. Исторически сложилось, что инъекции в кровоток были сделаны непосредственно через сердце. Однако, это внутри-сердечной процедура имеет очень высокий уровень смертности, как сердце часто проколотые во время инъекции оставив рыбы склонны к инфекциям, массивная кровопотеря или смертельные повреждения органа. Опираясь на наш опыт работы с мышью, мы разработали новую процедуру инъекции в данио, в котором месте инъекции находится позади глаз и в ретро-орбитальной венозного синуса. Это ретро-орбитальной (RO) инъекции метод был успешно применен в обоих инъекции препаратов у взрослых рыб, а также трансплантация клеток костного мозга целом почки. RO инъекции имеет гораздо более низкий уровень смертности по сравнению с традиционными внутри-сердечных инъекций. Рыбы, которые вводят ретро-орбитально, как правило, меньше кровоточить после инъекции и находятся на гораздо более низкий риск повреждения основной орган, как сердце. Кроме того, если будут выполнены должным образом, вводили клетки и / или наркотиков, быстро попадают в кровоток позволяет соединений оказывать свое влияние на всю рыбу и клетки почек легко домой к своим нишу. Таким образом, эта новая техника инъекций снижает смертность позволяя при этом эффективную доставку материала в крови взрослых рыб. Здесь мы иллюстрируют этот метод, ретроорбитального инъекции Tg (<em> Глобина</em>: GFP) клеток во взрослых<em> Каспер</em> Рыбы, а также введение красного красителя флуоресцентные (декстран, Texas Red<em></em>) Во взрослых<em> Каспер</em> Рыбы. Затем мы себе успешных инъекций целыми микроскопии флуоресценции животного.
Protocol
Discussion
Ретро-орбиту у взрослых данио дает наибольшую эффективность доставки вводят материал в кровоток с самой низкой частоты смертности. Из-за характера инъекции месте прокола кажется заживают быстро, уменьшая возникновения инфекции и объем кровопотери. Сайте, могут быть даже неоднократно…
Acknowledgements
Эта работа проводится при поддержке Медицинского института Говарда Хьюза и грант NIH для изучения эмбрионального кроветворения.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M. A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).
- White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis. Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).
- LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish. J. Vis. Exp. , (2007).
