Retro-orbital de inyección en adultos de pez cebra

Summary

Aquí te mostramos cómo hacer retro-orbital de la inyección en adultos de pez cebra.

Abstract

El tratamiento farmacológico de la totalidad de animales es una herramienta esencial en cualquier sistema modelo para estudios genéticos farmacológicos y químicos. Intravenosa (IV) de la inyección es a menudo la forma más eficaz y no invasiva de administración de un agente de interés. En el pez cebra (<em> Danio rerio</em>), La inyección intravenosa de drogas ha sido un desafío debido a que el diámetro de pequeños vasos. Esto también ha demostrado ser un obstáculo significativo para la inyección de las células durante el trasplante de células madre hematopoyéticas. Históricamente, las inyecciones en el torrente sanguíneo se realiza directamente a través del corazón. Sin embargo, este procedimiento intra-cardíaca tiene una mortalidad muy elevada, el corazón suele ser perforado durante la inyección de dejar a los peces propensos a la infección, pérdida masiva de sangre o daño en los órganos fatal. Basándonos en nuestra experiencia con el ratón, hemos desarrollado un procedimiento de inyección de nuevo en el pez cebra en el que el sitio de la inyección está detrás de los ojos y en el seno venoso retro-orbital. Este retro-orbital (RO) la técnica de inyección se ha empleado con éxito tanto en la inyección de drogas en los peces adultos, así como el trasplante de células de riñón de toda la médula ósea. RO de inyección tiene una tasa de mortalidad mucho más bajo que los tradicionales de inyección intra-cardiaca. Los peces que se inyectan retro-orbital tiende a sangrar menos después de la inyección y se encuentran en un riesgo mucho menor de lesión a un órgano principal como el corazón. Las células más, cuando se realiza correctamente, se inyecta y / o drogas rápidamente entran al torrente sanguíneo lo que permite a los compuestos ejercen su efecto sobre todo el pescado y las células de riñón de manera fácil en casa a su nicho. Por lo tanto, esta técnica reduce al mínimo la mortalidad nueva inyección al tiempo que permite la prestación eficiente de materiales en el torrente sanguíneo de los peces adultos. Aquí tenemos un ejemplo de esta técnica de retro-orbital inyección de Tg (<em> Globina</em>: GFP) en células adultas<em> Casper</em> Peces, así como la inyección de un tinte rojo fluorescente (dextrano, Texas Red<em></em>) En adultos<em> Casper</em> Peces. A continuación, visualizar las inyecciones de éxito mediante microscopía de fluorescencia de todo animal.

Protocol

Parte 1. Preparación de material de inyección Tg (globina: GFP) células: Sangran los peces donante adulto con punta de la pipeta 10 ul recubiertos de heparina (1unit/ul) para los peces pinchazo detrás de enmalle. Aspirar las células rojas de la sangre y dispensar en tampón de células (0,9 x PBS + 5% de SFB + pluma 1% / estreptomicina). Suspensión de células de filtro sobre la malla 40uM y determinar la concentración de las células utilizando hemocitómetro com…

Discussion

Retro-orbital de la inyección en adultos de pez cebra ofrece la más alta eficiencia de la entrega de material inyectado en el torrente sanguíneo con la menor incidencia de la mortalidad. Debido a la naturaleza del lugar de la inyección, la punción parece sanar rápidamente, disminuyendo la incidencia de la infección y la cantidad de sangre perdida. El sitio incluso pueden ser inyectados repetidamente durante un corto período de tiempo para las inyecciones diarias de medicamentos, por ejemplo.

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Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa		Sigma-Aldrich	2106	Preweighed vial of 300 USP units
Tricaine-S		Western Chemical		MS-222
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline		Invitrogen	14190-144
Dextran, Texas Red®		Molecular Probes Inc.	D1830
E3				5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2
Microliter Syringe		Hamilton	80300	701N 10uL SYR (26s/2”/2)