Retro-orbital injektionsvätska till vuxna Zebrafish
Summary
Här visar vi hur du gör retro-orbital injektionsvätska till vuxna zebrafisk.
Abstract
Läkemedelsbehandling av hela djur är ett viktigt verktyg i alla modellsystem för farmakologiska och kemiska genetiska studier. Intravenös (IV) injektion är ofta den mest effektiva och icke-invasiv form av leverans av en agent av intresse. I zebrafisk (<em> Danio rerio</em>) Har IV injektion av läkemedel har länge varit en utmaning på grund av det lilla fartyget diameter. Detta har också visat en betydande hinder för injektion av celler under hematopoetisk stamcellstransplantation. Historiskt sett var injektioner i blodet sker direkt genom hjärtat. Detta har dock Intrakardiella förfarande en mycket hög dödlighet som hjärtat är ofta punkteras under injektion lämnar fisken utsatta för infektion, massiv blodförlust eller dödliga organskador. Ritning på vår erfarenhet med musen, har vi utvecklat en ny injektion förfarande i zebrafisk där injektionsstället är bakom ögat och in i retro-orbital venösa sinus. Denna retro-orbital (RO) injektionsteknik har framgångsrikt används i både injektion av läkemedel i vuxen fisk samt transplantation av hela celler njure märg. RO injektion har en mycket lägre dödlighet än traditionella Intrakardiella injektion. Fisk som injiceras retro-orbitally blöder mindre efter injektion och är på en mycket lägre risk för skada på ett huvudsakligt organ som hjärta. Vidare när de utförs på rätt sätt, injiceras celler och / eller narkotika in snabbt i blodomloppet så att föreningar att utöva sin effekt på hel fisk och celler njure enkelt hem till sin nisch. Därmed minimerar denna nya injektionsteknik mortalitet samtidigt som effektiv leverans av material i blodet av vuxen fisk. Här har vi exempel på denna teknik med retro-orbital injektion av Tg (<em> Globin</em>: GFP) celler i vuxen<em> Casper</em> Fisk samt injektion av en röd fluorescerande färg (dextran, Texas Red<em></em>) I vuxen<em> Casper</em> Fisk. Vi visualiserar då framgångsrika injektioner av hela djuret fluorescensmikroskopi.
Protocol
Discussion
Retro-orbital injektionsvätska till vuxna zebrafisk ger den högsta effektiviteten i leveransen av injicerade materialet till blodomloppet med den lägsta förekomsten av dödlighet. På grund av arten av injektionen plats, verkar punktering att läka snabbt, minska förekomsten av infektioner och mängden blod förlust. Webbplatsen kan även vara flera gånger injiceras under en kort tid för dagliga injektioner av läkemedel, till exempel.
Stora mängder narkotika måste köpas för tradi…
Acknowledgements
Detta arbete stöds av Howard Hughes Medical Institute och ett bidrag från NIH för studiet av embryonala blodbildningen.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
References
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M. A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).
- White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis. Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).
- LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish. J. Vis. Exp. , (2007).
