فك رموز محواري مقررات تمهيدية للمجموعات المحددة وراثيا من الخلايا العصبية في الأنبوبة العصبية الاستفادة الفرخ في البيضة Electroporation
Summary
هذا الفيديو يوضح كيفية تصور مسارات محواري مجموعات محددة وراثيا من الخلايا العصبية في النخاع الشوكي باستخدام الفرخ الجنينية<em> في البيضة</em> electroporation الجينات مراسل تحت سيطرة عناصر محسن محددة.
Abstract
توظيف عناصر محسن إلى محرك التعبير عن الجينات في الخلايا العصبية المراسل هو نموذج يستخدم على نطاق واسع لتعقب محواري الإسقاط. لتتبع من الإسقاط محواري interneurons الشوكي في الفقاريات ، والجينات الجرثومية مراسل خط استهداف العائد العلامات المتماثلة ثنائيا. لذلك ، فإنه من الصعب التمييز بين ipsi ومضاد أفقيا المحاوير إسقاط. electroporation من جانب واحد في الأنبوب العصبي الفرخ يوفر وسيلة مفيدة لتقييد حرية التعبير لجين مراسل لجانب واحد من الجهاز العصبي المركزي ، ومتابعة محواري الإسقاط على كلا الجانبين<sup> 1 ،2 – 5</sup>. هذا الفيديو يوضح أولا كيف لمعالجة البيض قبل الحقن. في مرحلة سمو 18-20 ، يتم حقن الحمض النووي في مستوى العجز في الأنبوب العصبي ، ثم يتم وضع أقطاب كهربائية التنغستن موازية للجنين وتدار النبضات الكهربائية قصيرة مع مولد النبض. وختم الشريط مع البيض ويوضع مرة أخرى في حاضنة لمزيد من التطوير. بعد ثلاثة أيام (E6) هو إزالة الحبل الشوكي بمثابة إعداد كتاب مفتوح من جنين ، والثابتة ، ومعالجتها للجسم كله تلطيخ جبل. هي التي شنت على الحبل الشوكي ملون على الشريحة وتصور باستخدام المجهر مبائر.
Protocol
Discussion
Electroporation من الحمض النووي البلازميد في تطور الجنين الفرخ كأسلوب في التعبير قوية لحمل خارج الرحم الجسم الحي. مزيج من معززات محددة ، وفرخ electroporation يوفر أداة سريعة وفعالة لفك المسارات محواري من مجموعة محددة من الخلايا العصبية وراثيا 1،3،5. ويمكن الاستفادة من لجنة ال?…
Acknowledgements
وأيد هذا العمل عن طريق منح لحزب العدالة والتنمية من مؤسسة العلوم إسرائيل ، وزارة الصحة الإسرائيلية ، وDFG (مؤسسة البحوث الألمانية).
References
- Zisman, S., et al. Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule. J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).
- Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate. Brain Res. 1223, 25-33 (2008).
- Avraham, O., et al. Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1. Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).
- Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers. Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).
- Reeber, S. L., et al. Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord. J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).
