利用鸡胚神经管破译基因定义的组的神经元轴突途径在OVO电穿孔
Summary
本视频演示了如何进行可视化基因定义组在鸡胚脊髓利用线中的神经元轴突途径<em>在OVO</em>电记者基因特定的增强子元件的控制下。
Abstract
增强子驱动报告基因的表达在神经元的就业是一个广泛使用的范式跟踪轴突投射。轴突投射，在脊椎动物的脊髓interneurons跟踪，生殖系有针对性的记者基因产生双边对称的标签。因此，它是很难区分的IPSI和禁忌横向预测轴突。单方面电到鸡胚神经管提供了有益的手段限制记者基因表达的中枢神经系统的一侧，并按照双方的轴突投射<sup> 1 ,2 – 5</sup>。本视频演示了第一，如何处理的鸡蛋在注射之前，。 HH阶段18日至20日，DNA注入到骶神经管水平，然后钨电极平行放置胚胎，短的电脉冲脉冲发生器的管理。鸡蛋是用胶带密封，并放入孵化器的进一步发展。三天后（E6）脊髓是从胚胎取出，打开书准备，固定，并为整个安装抗体染色处理。染色脊髓安装幻灯片和可视化使用共聚焦显微镜。
Protocol
一，电穿孔蛋处理 37-38 ° C，最好的孵化器与一个摇摆托盘放置在培养箱集蛋。 胚胎电穿孔后的潜伏期约66小时，当他们到达汉堡和汉密尔顿（HH）阶段18-20。在这个阶段，头部直角在于主干（称为颈椎弯曲的条件）和一个广阔的设置，如前，后，左，右卵黄静脉应被视为额外的胚胎血管。这是一个依赖增强的具体体现1,3,4的最佳阶段。重要的是要监测温度?…
Discussion
作为一个强大的技术，在体内的异位表达质粒DNA进入鸡胚电穿孔的发展。具体的促进剂，和小鸡电的结合提供了一个快速和有效的工具，破译基因定义组的神经元1,3,5轴突途径。利用CRE / LoxP位Gal4/UAS放大系统，可以增加表达水平和持续时间。新兴的图片是一个轴突的线索，从中间神经亚群，其轴突预测的方向定义产生的复杂分歧。此外，同时分子和空间限制的两个神经元群体的标签可以达…
Acknowledgements
这项工作是支持由以色列科学基金会，以色列健康部，和DFG（德国研究基金会）资助的AK。
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Tags
Axonal PathwaysGenetically Defined NeuronsChick Neural TubeIn Ovo ElectroporationEnhancer ElementsReporter GenesTracking Axonal ProjectionSpinal InterneuronsGerm Line-targeted Reporter GenesBilateral LabelingIpsi- And Contralaterally Projecting AxonsUnilateral ElectroporationCentral Nervous SystemHandling EggsInjectionTungsten ElectrodesElectrical PulsesPulse GeneratorIncubatorSpinal Cord PreparationWhole Mount Antibody StainingConfocal Microscopy
Cite This Article
Avraham, O., Zisman, S., Hadas, Y., Vald, L., Klar, A. Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation. J. Vis. Exp. (39), e1792, doi:10.3791/1792 (2010).