פענוח מסלולים axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים התחתית צ'יק עצבית ניצול ב אובו Electroporation
Summary
וידאו זה מדגים כיצד לדמיין מסלולי axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים בחוט השדרה ניצול חומוס עובריים<em> ב אובו</em> Electroporation של גנים כתב תחת שליטתה של אלמנטים ספציפיים משפר.
Abstract
התעסוקה של אלמנטים משפר לנהוג הביטוי של גנים כתב בנוירונים הוא פרדיגמה בשימוש נרחב עבור מעקב הקרנת axonal. למעקב הקרנת axonal של interneurons השדרה חוליות, קו במיקוד נבט גנים כתב תשואה תיוג סימטרי בילטרלי. לכן, קשה להבחין בין ipsi ו קונטרה-רוחבית אקסונים מקרין. Electroporation חד צדדית לתוך הצינור העצבי חומוס מספק אמצעי שימושי להגביל את הביטוי של הגן כתב בצד אחד של מערכת העצבים המרכזית, ולעקוב אחר התחזית axonal משני הצדדים<sup> 1 ,2-5</sup>. וידאו זה מדגים הראשונה איך להתמודד עם ביצים לפני הזריקה. באותו שלב HH 18-20, הדנ"א מוזרק לתוך רמת העצה של הצינור העצבי, אז אלקטרודות טונגסטן ממוקמים במקביל העובר ואת פולסים חשמליים קצרים מנוהלים עם גנרטור הדופק. ביצה היא חתומה עם סרט והניח בחזרה באינקובטור להמשך פיתוח. כעבור שלושה ימים (E6) חוט השדרה הוסר כהכנה ספר פתוח מעובר קבועה, ומעובד מכתים הר שלם נוגדן. חוט השדרה מוכתם הוא רכוב על שקופיות דמיינו באמצעות מיקרוסקופיה confocal.
Protocol
Discussion
Electroporation של DNA פלסמיד לתוך העובר מתפתח אפרוח כטכניקה עוצמה בביטוי חוץ רחמי vivo. השילוב של משפרי ספציפי, electroporation חומוס מספק כלי מהיר ויעיל עבור פענוח מסלולים axonal של קבוצה מוגדרת גנטית של נוירונים 1,3,5. ניצול Cre / LoxP ומערכות הגברה Gal4/UAS יכולים להגדיל את רמות ומשך הביטו…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים AK מן הקרן הלאומית למדע, משרד הבריאות, DFG (גרמנית Research Foundation).
References
- Zisman, S., et al. Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule. J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).
- Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate. Brain Res. 1223, 25-33 (2008).
- Avraham, O., et al. Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1. Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).
- Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers. Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).
- Reeber, S. L., et al. Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord. J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).
