Decifrare Percorsi assonale di gruppi geneticamente definito di neuroni nel tubo neurale Chick Utilizzando In ovo Elettroporazione
Summary
Questo video viene illustrato come visualizzare i percorsi assonale di gruppi geneticamente definita di neuroni nel midollo spinale embrionale pulcino utilizzando<em> In ovo</emElettroporazione> di geni reporter sotto il controllo di specifici elementi enhancer.
Abstract
Impiego di elementi enhancer di guidare l'espressione di geni reporter nei neuroni è un paradigma ampiamente utilizzato per il monitoraggio proiezione assonale. Per il monitoraggio proiezione assonale degli interneuroni spinali nei vertebrati, della linea germinale mirati geni reporter indicazione del tenore simmetria bilaterale. Pertanto, è difficile distinguere tra il ipsi-e contro-lateralmente assoni proiezione. Elettroporazione unilaterale nel tubo neurale pulcino fornisce un mezzo utile per limitare l'espressione di un gene reporter per una parte del sistema nervoso centrale, ed a seguire proiezione assonale su entrambi i lati<sup> 1 ,2-5</sup>. Questo video mostra come gestire prima le uova prima dell'iniezione. In fase HH 18-20, il DNA è iniettato nel livello sacrale del tubo neurale, poi elettrodi di tungsteno sono posti in parallelo per l'embrione e brevi impulsi elettrici vengono somministrati con un generatore di impulsi. L'uovo è sigillato con nastro adesivo e rimesso in un incubatore per un ulteriore sviluppo. Tre giorni dopo (E6) il midollo spinale viene rimosso come un libro aperto preparazione dall'embrione, fissi, e trattati per tutta la colorazione degli anticorpi mount. Il midollo spinale è macchiato montato sulla slitta ed è visualizzato mediante microscopia confocale.
Protocol
Discussion
Elettroporazione di DNA plasmidico in embrione di pollo si evolve come una tecnica potente per in vivo espressione ectopica. La combinazione di stimolatori specifici, ed elettroporazione pulcino fornisce uno strumento rapido ed efficace per decifrare le vie assonale di un gruppo di neuroni geneticamente definito 1,3,5. Utilizzando la Cre / loxP ed i sistemi di amplificazione Gal4/UAS può aumentare i livelli e la durata di espressione. Il quadro che emerge è di una divergenza complesso di spunti assonale che…
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni di AK dalla Israel Science Foundation, il ministero israeliano della sanità, e DFG (tedesco Research Foundation).
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