活用チック神経管の神経細胞の遺伝的に定義されたグループの軸索経路の解読卵のエレクトロポレーション
Summary
このビデオは利用してニワトリ胚脊髄の神経細胞の遺伝的に定義されたグループの軸索経路を可視化する方法を示しています<em>卵の</em特定のエンハンサーエレメントの制御下にレポーター遺伝子の>エレクトロポレーション。
Abstract
神経細胞におけるレポーター遺伝子の発現を駆動するエンハンサーエレメントの雇用は、軸索投射を追跡するために広く使用されているパラダイムである。脊椎動物における脊髄介在ニューロンの軸索投射を追跡するために、生殖細胞ラインをターゲットとしたレポーター遺伝子としては、左右対称ラベルをもたらす。したがって、それは、IPSI -＆コントラ横方向に突出する軸索を区別するのは困難です。ひよこ神経管への一方的なエレクトロポレーションは、中枢神経系の一方の側にレポーター遺伝子の発現を制限するために、そして両側に軸索投射に従うことが有用な手段を提供します。<sup> 1 ,2 – 5</sup>。このビデオでは、注射前に卵を処理する方法を第一を示しています。 HHステージ18から20で、DNAは神経管の仙骨レベルに注入され、その後、タングステン電極は、胚に平行に配置され、短い電気パルスは、パルス発生器で投与されています。卵は、テープで密封し、さらなる発展のためにインキュベーターに戻されます。三日後（E6）脊髄は、胚から開いた本の準備として除去固定されており、全体のマウントの抗体染色のために処理されます。ステンド脊髄は、スライド上にマウントし、共焦点顕微鏡を用いて可視化されています。
Protocol
Discussion
ニワトリ胚へのプラスミドDNAのエレクトロポレーションは、生体内異所性発現のための強力な技術として進化しています。特定のエンハンサー、およびニワトリのエレクトロポレーションの組み合わせは、神経細胞1,3,5の遺伝学的に定義されたグループの軸索経路を解読するための迅速かつ効率的なツールを提供しています。のCre / loxP部位とGal4/UAS増幅システムを活用すれば、表現の…
Acknowledgements
この作品は、イスラエル科学財団、健康のイスラエル省、およびDFG（ドイツ研究協会）からAKへの補助金によって支えられている。
References
- Zisman, S., et al. Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule. J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).
- Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate. Brain Res. 1223, 25-33 (2008).
- Avraham, O., et al. Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1. Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).
- Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers. Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).
- Reeber, S. L., et al. Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord. J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).
