활용 칙 신경 튜브에서 뉴런의 유전 정의된 그룹 Axonal 경로를 벗기기 비켜에서 Electroporation
Summary
이 동영상은 이용 배아 여자 척수에서 뉴런의 유전자 정의된 그룹의 axonal 경로를 시각화하는 방법을 보여줍니다<em> 비켜에서</em특정 향상제 요소의 통제하에 기자 유전자> electroporation.
Abstract
뉴런에서 기자 유전자의 표현 드라이브 향상제 요소의 고용은 axonal 투영를 추적하기위한 널리 사용되는 패러다임이다. 척추 동물에서 척추 interneurons의 axonal 투영을 추적하는 경우, 세균 라인 타겟 기자의 유전자가 좌우 대칭으로 대칭 상표를 얻을 수 있습니다. 따라서, 그것은 ipsi 및 콘트라 옆으로 돌출 axons을 구별하기 어렵습니다. 여자가 신경 튜브로 일방적 electroporation은 중추 신경계의 한쪽으로 리포터 유전자의 표현을 제한하고, 양쪽에 axonal 영사에 따라 유용한 수단을 제공<sup> 1 ,2 – 5</sup>. 이 동영상은 주사하기 전에 달걀을 처리하는 방법 첫째 보여줍니다. HH 단계 18-20에서 DNA는 신경 튜브의 성례의 수준으로 주입 후, 텅스텐 전극은 배아에 병렬 배치하고 짧은 전기 펄스는 펄스 발생기와 함께 관리됩니다. 계란은 테이프로 봉인과 발전을위한 인큐베이터에 다시 배치됩니다. 사흘 후 (E6) 척수는 배아에서 열린 도서 준비로 제거 고정하고, 전체 마운트 항체 염색법에 대한 처리됩니다. 스테인드 척수가 슬라이드 장착과 공촛점 현미경을 사용하여 시각입니다.
Protocol
Discussion
여자의 배아에 플라스미드 DNA의 Electroporation은 생체내 이소성 표현을위한 강력한 기술로 발전. 특정 강화하고, 여자의 electroporation의 결합 뉴런 1,3,5의 유전자 정의된 그룹의 axonal 경로를 파악을 위해 신속하고 효율적인 도구를 제공합니다. Cre 호텔 / LoxP 및 Gal4/UAS의 증폭 시스템을 활용하는 것은 표현의 수준 및 기간을 확대하실 수 있습니다. 새로운 그림들은 axonal 계획의 방향에 의해 정?…
Acknowledgements
이 작품은 이스라엘 과학 재단, 건강의 이스라엘 사역 및 DFG (독일 학술 진흥 재단)에서 AK로 보조금에 의해 지원되었다.
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