Расшифровка аксонального Пути генетически определенные группы нейронов в Чик нервной трубки Используя В ово Электропорация
Summary
В этом видеоролике показано, как визуализировать аксонального пути генетически определенных групп нейронов в эмбриональном куриных спинного мозга использования<em> В ово</em> Электропорации репортер генов под контролем конкретных элементов усилителя.
Abstract
Занятость элементов усилителя управлять выражением репортер генов в нейронах широко используется парадигма для отслеживания аксонального проекции. Для отслеживания аксонального проекции спинного интернейронов у позвоночных, зародышевой линии ориентированные гены репортер выход двусторонней симметричной маркировки. Таким образом, трудно провести различие между ипси-и контр-латерально проектирование аксонов. Односторонние электропорации в куриных нервной трубки является полезным средством для ограничения выражения гена-репортера с одной стороны центральной нервной системы, а также следовать аксонального проекции с обеих сторон<sup> 1 ,2-5</sup>. Это видео демонстрирует первые, как обращаться с яйцами перед инъекцией. На этапе HH 18-20, ДНК вводится в сакральный уровень нервной трубки, то вольфрамовые электроды расположены параллельно эмбриона и короткие электрические импульсы вводятся с генератора импульсов. Яйцо запечатанных скотчем и положил обратно в инкубатор для дальнейшего развития. Через три дня (E6) спинного мозга удаляется как открытая подготовка книги из эмбриона, фиксированная, и обрабатываемых в целом меченых антител монтирования. Окрашенных спинного мозга устанавливается на слайд и визуализируется с помощью конфокальной микроскопии.
Protocol
Discussion
Электропорация плазмидной ДНК в куриных эмбрионах, как развивается мощная техника для прижизненного эктопической экспрессии. Сочетание конкретных усилителей, а также куриных электропорации обеспечивает быстрый и эффективный инструмент для расшифровки аксонального пути генетическ…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами для АК от Израиля научный фонд, Министерство здравоохранения Израиля и DFG (Немецкий исследовательский фонд).
References
- Zisman, S., et al. Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule. J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).
- Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate. Brain Res. 1223, 25-33 (2008).
- Avraham, O., et al. Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1. Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).
- Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers. Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).
- Reeber, S. L., et al. Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord. J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).
