Nöronlar, Genetik Tanımlı Gruplar Aksonal tanımında kullanılması Civciv Nöral Tüp Deşifre Ovo Elektroporasyon
Summary
Bu video nöronların genetik olarak tanımlanan gruplar aksonal yollar kullanarak embriyonik civciv omurilik görselleştirmek için nasıl gösterir<em> Ovo</em> Muhabiri genlerin kontrolü altında belirli artırıcı unsurların elektroporasyon.
Abstract
Nöronlarda muhabiri genlerin ifade sürücü İstihdam artırıcı unsurları aksonal projeksiyon izlemek için yaygın olarak kullanılan bir paradigma. Omurgalılarda spinal internöronlar aksonal projeksiyon izleme, germ line-hedefli muhabiri genler bilateral simetrik etiketleme verim. Bu nedenle, IPSI ve kontra-yanal projelendirme aksonlar ayırt etmek zordur. Civciv nöral tüp tek taraflı elektroporasyon, merkezi sinir sisteminin bir tarafı bir muhabir gen ifadesini sınırlamak ve her iki tarafta aksonal projeksiyon takip etmek faydalı bir araç sağlar<sup> 1 ,2-5</sup>. Bu video ilk enjeksiyon öncesinde yumurta nasıl işleneceğini gösteriyor. HH evre 18-20, DNA sakral nöral tüp içine enjekte edilir, daha sonra tungsten elektrotlar embriyo paralel olarak yerleştirilir ve kısa bir darbe jeneratörü elektrik darbeleri ile yönetilmektedir. Yumurta bandı ile kapatılmış ve daha da geliştirilmesi için bir inkübatör içine geri yerleştirilir. Üç gün sonra (E6) omurilik, embriyo açık bir kitap hazırlık olarak kaldırılır sabit ve tüm montaj antikor boyama için işlenmiş. Lekeli omurilik slayt monte edilir ve konfokal mikroskopi kullanılarak görüntülendi.
Protocol
Discussion
Civciv embriyo içine plazmid DNA Elektroporasyon in vivo ektopik ifade için güçlü bir teknik olarak gelişiyor. Özel arttırıcılar ve civciv elektroporasyon kombinasyonu nöronlar 1,3,5 genetik olarak tanımlanan bir grup aksonal yollar deşifre için hızlı ve etkili bir araç sağlar . Cre / LoxP ve Gal4/UAS amplifikasyon sistemlerinin kullanılması ifade düzeyleri ve süresini arttırır. Ortaya çıkan resim interneuron alt popülasyonlar, kendi aksonal projeksiyonlar yönü ile tanımlanan kay…
Acknowledgements
Bu çalışma, İsrail Bilim Vakfı, İsrail sağlık bakanlığı, ve DFG (Alman Araştırma Vakfı) AK hibe tarafından desteklenen oldu.
References
- Zisman, S., et al. Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule. J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).
- Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate. Brain Res. 1223, 25-33 (2008).
- Avraham, O., et al. Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1. Neural Dev. 4 (1), 21 (2009).
- Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers. Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).
- Reeber, S. L., et al. Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord. J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).
