Medaka ו דג הזברה משלימות לניתוח גנטי של פונקציות הגנום החולייתנים. פרוטוקול זה מדגיש את נקודות המפתח עבור microinjection מוצלח לעוברי medaka, טכניקה חשובה לניתוח העוברית ואת גנטי באמצעות medaka ו דג הזברה במעבדה.
בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את הטכניקה של microinjection לאחד תאים בשלב עוברי medaka. Medaka הוא דג קטן ההטלה מים מתוקים המאפשר ניתוח הן גנטיות העוברית הוא אחד היצורים מודל חוליות שבו הגנום כולו פנוטיפ מונחה מסכי מוטציה בוצעו 1, כמו דג הזברה והעכבר. החפיפה סטייה תפקודית של גנים הקשורים בין medaka ו דג הזברה מאפשר זיהוי של פנוטיפים רומן כי הם ניתנים לזיהוי ב זן יחיד 2, ובכך medaka ו דג הזברה משלימות לניתוח גנטי של פונקציות הגנום החולייתנים.
כדי לנצל את הדגים medaka אשר עוברים הם שקופים ולפתח חיצונית, microinjection היא טכניקה חיונית להזריק תא קליעים נותבים עבור תאים, mRNAs תיוג או תחושה אנטי oligonucleotides במשך-לבטא ו דפיקות מטה הגנים של עניין, DNAs להכנת מהונדס הקווים.
בסרטון הזה, אנחנו מראים שיטה נותב התא, ה-mRNA, ה-DNA או oligonucleotide אנטי תחושה זריקה לתוך אחד התאים בשלב עוברי medaka. טכניקה זו אפשרה לנו לבחון תהליכים התפתחותיים שונים ב-vivo בזמן אמת. תהליך זה לבין ניתוח מפורט בהמשך היא מספקת יש פוטנציאל לשפר באופן משמעותי את הבנתנו organogenesis החולייתנים לבין ביולוגיה של התא הבסיסי. ידע כזה עשוי להיות חשוב, ואת התשואה יישומים טיפולית רפואה רגנרטיבית.
עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם MRC.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |