Experimentele Metastase Assay

Summary

Dit artikel beschrijft de procedures van een experimentele metastase test die wordt gebruikt om de metastatisch potentieel van kanker bij de mens cellijnen te bepalen.

Abstract

Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Om te begrijpen van het mechanisme van metastase, was een experimenteel metastase assay bepaald aan de hand immunodeficiënte muizen. Dit artikel schetst de procedures die in deze test, inclusief monstervoorbereiding, intraveneuze injectie, en het kweken cellen van longmetastasen. In het kort werden een vooraf bepaald aantal van menselijke kankercellen voorbereid<em> In vitro</em> En direct ingespoten in de circulatie van immunodeficiënte muizen door middel van hun staart aderen. Een klein aantal cellen overleven de turbulentie in de circulatie en te groeien als uitzaaiingen in de interne organen, zoals de long. De geïnjecteerde muizen zijn ontleed na een bepaalde periode. Het weefsel verspreiding van metastasen is bepaald volgens een dissectie microscoop. Het aantal metastasen in een specifiek weefsel is geteld en het rechtstreeks correleert met de metastatische vermogen van de geïnjecteerde kankercellen. De ontstane metastasen worden geïsoleerd en gekweekt<em> In vitro</em> Als cellijnen, die vaak versterkt gemetastaseerde mogelijkheden dan de ouderlijke lijn wanneer weer geïnjecteerd in immunodeficiënte muizen. Deze zeer gemetastaseerde derivaten worden nuttige instrumenten voor het identificeren van genen of moleculaire pathways die metastatische progressie reguleren.

Protocol

1. Monstervoorbereiding Grow cellen ~ 70% confluent in hun specifieke media met groeifactoren of FBS (bijvoorbeeld DMEM met 10% FBS voor de MC-1-cellen). Aspireren media van plaat-en voorzichtig een paar keer wassen met 1 x PBS (8 g / L NaCl, 0,2 g / L KCl, 1,15 g / L van Na 2 HPO 4 0.7 H 2 O, 0,2 g / L van KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspireren PBS en voeg 2 ml van 0,05% trypsine in Versene (0,014 g / L van fenol rood en 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH…

Discussion

Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Het gaat om vier belangrijke stappen: losmaken van kankercellen uit hun primaire loci, in het verkeer brengen (intravasation), hun exit uit de circulatie (extravasatie), en overleving en de groei in een verre orgaan. Metastasen in de mens wordt beschouwd als een langzaam proces en vaak gemanifesteerd na jaren van latentie. Het bestuderen van de progressie in een tijdig, was de bovenstaande relatief snel experimentele test opgericht in immuno…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Invitrogen	10313-021
FBS		Hyclone	SH30088.03
HBSS		Invitrogen	14175-095
NaCl		Sigma-Aldrich	S9888
KCl		Mallinckrodt Chemicals	6838-04
Na2 HPO4.7H2O		Mallinckrodt Chemicals	7896-04
KH2PO4		Mallinckrodt Chemicals	7100-12
Phenol red		Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na		EMD Biosciences	4010
Trypan Blue		Invitrogen	15250-061
Trypsin 2.5%		Invitrogen	15090-046
Ethanol		Ultrapure	200-CSGP
50 ml Falcon Tube		VWR	89039-656
Microcentrifuge Tubes		Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70µm Cell Strainer		BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube		VWR	60818-576
Hemacytometer		Hausser Scientific	15170-208
1 ml syringe		BD Biosciences	329650
30 ½ gauge needle		BD Biosciences	305106
Mouse restrainer		Plas Labs Inc.	551-BSRR
Surgical scissors		Fisher Scientific	08-940
Forceps		Fisher Scientific	08-902
Dissecting Microscope		Nikon	SMZ1500
Benchtop Centrifuge		Thermoscientific	75003491