Live-cell imaging e analisi quantitativa della embrionali in cellule epiteliali Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.
Abstract
Embrionale cellule epiteliali servire come un modello ideale per studiare la morfogenesi in cui multicellulari tessuti subiscono cambiamenti nella loro geometria, quali i cambiamenti nella zona delle cellule di superficie e altezza della cella, e dove le cellule subiscono mitosi e migrano. Inoltre, le cellule epiteliali possono anche regolare i movimenti morfogenetici nei tessuti adiacenti<sup> 1</sup>. Un metodo tradizionale per lo studio delle cellule epiteliali e dei tessuti coinvolgere fissaggio chimico e metodi istologici per determinare la morfologia cellulare o la localizzazione di proteine di particolare interesse. Questi approcci continuano ad essere utili e fornire "istantanee" di forme e l'architettura delle cellule dei tessuti, tuttavia, resta ancora molto da capire su come le cellule acquisiscono forme specifiche, come le proteine varie spostare o localizzare in posizioni specifiche, e ciò che le cellule seguono percorsi verso la loro definitiva destino differenziato. Ad alta risoluzione di immagini dal vivo integra i metodi tradizionali e consente anche un'indagine più diretto nei processi dinamici cellulari coinvolti nella formazione, manutenzione, e morfogenesi dei pluricellulari fogli epiteliali. Qui mostriamo metodi sperimentali dall'isolamento dei tessuti animali da tappo<em> Xenopus laevis</em> Embrioni per l'imaging confocale di cellule epiteliali e gli approcci di misurazione semplice, che insieme possono aumentare gli studi molecolari e cellulari della morfogenesi epiteliale.
Protocol
Discussion
Abbiamo presentato protocolli sperimentali usati regolarmente nel nostro laboratorio di citoscheletro immagine che cambiano dinamicamente nella corteccia cellula apicale e oscillante membrane cellulari delle cellule epiteliali in embrioni di Xenopus. Si dovrebbe utilizzare questi protocolli come punto di partenza per il live-imaging delle forme delle cellule epiteliali, ottimizzazione di questo protocollo è essenziale e alcune delle impostazioni cambia a seconda del tipo di sistema microscopio si ha e il tipo …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato da una National Institutes of Health (R01-HD044750), una borsa di studio dalla National Science Foundation, e il supporto della American Heart Association (inizio Grant-in-Aid). Gli autori ringraziano i membri Davidson Lab: HY Kim, M. von Dassow e J. Zhou (per un aiuto con responsabilità di laboratorio tutti i giorni), e Lin Zhang per la sua assistenza nel campo della biologia molecolare e la sintesi di mRNA. Noi riconosciamo gli sforzi sperimentali da tutti i laboratori rana (soprattutto Ray Keller e Doug DeSimone) che hanno contribuito ad una parte di questo protocollo, attraverso lo sviluppo e metodi di prova diversi nel corso degli anni. Ringraziamo Richard Harland e John Wallingford per i loro doni tipo di mem-GFP e moesina-GFP plasmidi rispettivamente.
References
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