の準備ショウジョウバエ S2細胞
Summary
ショウジョウバエシュナイダー（S2）細胞は、遺伝子の発見と機能解析のためのますます普及システムです。私たちの目標は、このような重要性を増し、実験システムS2細胞を作る顕微鏡技術のいくつかを説明することです。
Abstract
理想的な実験系では、さまざまな技法に従順維持するために、安価で簡単になる、と広範な文献とゲノム配列のデータベースでサポートされる。培養ショウジョウバエ S2細胞を、引き離さ20〜24時間齢の胚1の製品は、すべてのこれらの特性を有する。そのため、S2細胞は非常に分子プロセスのコンポーネントまたは関心のメカニズムをコードする遺伝子の発見を含む細胞プロセスの分析に適しています。それらのユーティリティのほとんどの責任があるS2細胞の特徴は、二本鎖（ds）RNAを介した干渉（RNAi）、および蛍光顕微鏡への従順さ、ライブまたは固定のどちらかのように彼らの絶妙な感度、それらが維持されると使いやすさです細胞。
S2細胞は、安価な、市販の、完全に定義されて、無血清培地2の数を含め、様々なメディアに成長させることができる。さらに、彼らは21〜24℃で最適にかつ迅速に成長し、コンテナの様々な培養することができる。哺乳動物細胞とは異なり、S2細胞は安定化の雰囲気を必要としませんが、代わりに通常の空気とよく行い、さらに密閉フラスコに維持することができる。
S2細胞にRNAi実験のしやすさを補完するのが容易に相または固定またはライブの細胞の蛍光顕微鏡で実験的に誘発された表現型を解析する機能です。 S2細胞は、単一の単層として培養中で成長が接触阻害を表示しません。その代わりに、細胞が密集培養物中のコロニーに成長する傾向がある。低密度で、S2の文化は、ラウンドと、ゆるやかに接続されているガラスまたは組織培養用プラスチック上に成長。しかし、S2細胞の細胞診は非常にレクチン、コンカナバリンA（ConA）3を塗布した面に一時的に培養することにより、広くフラット化して、それらを誘導することによって改善することができます。 S2細胞はまた、安定してライブまたは固定化細胞への関心のラベルの構造や細胞小器官への蛍光タグ付きマーカーをトランスフェクトすることができます。したがって、細胞の顕微鏡分析のための通常のシナリオはこうです：まず、S2細胞は（タグ付きマーカーを発現する導入遺伝子を保有することができます）標的タンパク質（s）を除去するためにRNAiにより扱われます。 RNAi処理時間は、蛋白質の違いは、速度オーバーターンと標的蛋白質が存続にとって重要である場合、セルの外傷/死を最小限に抑えるためにできるように調整することができます。次に、処理した細胞を分散させる細胞を誘導し、しっかりとガラスに付着する錯那でプレコーティングカバースリップを含む皿に移しています。最後に、細胞を顕微鏡モードの研究者の選択方式で撮像する。これらの細胞は通常の室温、大気中で健康を維持するので、S2細胞は生細胞の拡張された可視化を必要とする研究に特に適しています。
Protocol
Discussion
細胞生物学の分野では、理想的なシステムは、維持するために安価な操作が容易、とのさまざまな技術に従順であろう。 ショウジョウバエ S2細胞がこれらの要件を満たすので、それらは急速に細胞の増加のために最適なシステムとなっている生物学研究所。
我々は、顕微鏡観察のためにS2細胞を準備する方法の概要を提示している。 S2細胞の顕著な美徳は、通常?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国立がん研究所P30 CA23074、米国癌学会機関研究助成74-001-31、および大学によって部分的にサポートされていました。アリゾナGI SPORE（NCI / NIH CA9506O）の。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| S2 cells | ATCC | CRL-1963 | http://www.atcc.org/ | |
| S2 cells | DGRC | stock number 6 | https://dgrc.cgb.indiana.edu/ | |
| S2 cells | Invitrogen | R690-07 | ||
| Sf900 II | Invitrogen | 10902-096 | serum-free medium | |
| HyClone SFX-Insect | Thermo Scientific | SH30278 | serum-free medium | |
| Insect-Xpress | BioWhittaker | 12-730 | serum-free medium | |
| Schneider’s S2 medium | Invitrogen | 11720-034 | Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium. | |
| Fetal bovine serum | Invitrogen | 10438026 | heat inactivated | |
| 100x antibiotic solution | MP Biomedicals | 91674049 | contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 μg/mL), and amphotericin B (25 μg/mL) |
|
| Concanavalin A | MP Biomedicals | 195283 | ||
| Formaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15714 | 32% solution | |
| Methanol | Mallinckrodt Baker | 9049 | anhydrous, ACS grade | |
| Molecular sieves | Acros Organics | 19724 | type 3A |
References
- Schneider, I. Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster. J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).
- Rogers, S. L., Rogers, G. C. Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy. Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).
- Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle. J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).
- Goshima, G. Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells. Science. 316, 417-421 (2007).
