Eletrofisiologia de zebrafish adulto: um método para medir a atividade elétrica extracelular dos neurônios in vivo

Abstract

Fonte: Johnston, L., et al. Gravação eletrofisiológica no cérebro de zebrafish adultos intactos.  J. Vis. Exp. (2013)

O protocolo descreve o procedimento para a realização de eletrofisiologia em zebrafish adulto. Este método pode ser usado para medir a atividade neural in vivo.

Protocol

1. Eletrofisiologia Desligue o stop-cock de intubação e desconecte rapidamente a trava Luer que liga a base de intubação ao gotejamento de tricaine. Mova a configuração de intubação intacta para o microscópio de eletrofisiologia e conecte-se ao sistema de perfusão. Ligue a água do habitat e peruse a uma taxa de 1 ml/min por ~1 hora, a fim de lavar a tricaine. Usando um micromanipulador sob controle visual, posicione o eletrodo secundário para que a ponta do …

Materials

Habitat water			pH 7.0-7.4, conductivity of 400-450 μS;  maintained by Instant Ocean and Sodium Bicarbonate
0.4% Tris-Buffered Tricaine	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7.2-7.4; stored at -20 oC
60 ml Luer lock syringe tubes	Becton, Dickinson and Company	309653
3-way Stopcocks with Luer connections
0.010 in Silver wire	A-M Systems, Inc.
Q-series electrode holder
Fisherbrand 100 mm x 15 mm Petri dish	Fisher Scientific	NC9299146
34 G Beveled needle	World Precision Instruments, Inc.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Kimberly-Clark Professional	TW31KEM
1/8 in diameter tube
1 mm diameter tube
Microscope (Leica MZ APO)	Another microscope can be used