In Vivo Elektroporation: Eine standortspezifische Methode zur Transfektion von Zebrafischen

Abstract

Quelle: Durovic, T., et al. Elektroporation Methode für in Vivo Lieferung von Plasmid DNA in der erwachsenen Zebrafisch Telencephalon. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt die In-vivo-Elektroporation, eine Technik zur DNA-Abgabe in ependymogliaale Zellen bei erwachsenen Zebrafischen.

Protocol

1. Elektroporation Entfernen Sie den Fisch aus dem Injektionssetup, während Sie ihn noch im Schwamm halten. Tauchen Sie die Innenseite der Spitze der Elektroden in das Ultraschallgel ein. Bedecken Sie den Fisch Telencephalon mit einer kleinen Menge Ultraschallgel. Positionieren Sie den Fischkopf zwischen den Elektroden, platzieren Sie die positive Elektrode an der ventralen Seite des Fischkopfes und die negative Elektrode auf der dorsalen Seite(Abbildung 1C), wäh…

Representative Results

Abbildung 1: Schematische Darstellung des koronalen Abschnitts des everted Zebrafischtelencephalons. (A) Schema eines koronalen Abschnitts von Zebrafischtelencephalon, Hervorhebung der Position von ependymoglialen Zellen, die ventrikuläre Oberfläche auskleidung und die ventrale ventrikuläre Wand bilden. Dorsale ependymale Schicht überbrückt die beiden Hemisphären und bedeckt die Herzkammer (V), die …

Materials

Ultrasound gel	SignaGel, Parker laboratories INC	15-60	Electrode Gel
BTX Tweezertrodes Electrodes	Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus	45-0486	1mm diameter
Electroporation device	BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus	45-0662