PDX 종양 세포를 표지하기 위하여 변환: 시험관에 있는 종양 세포로 형광 마커를 표현하는 렌즈바이러스를 소개합니다
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: 한나, C., 외. 종양 성장 및 전이 연구를 위한 추적 가능한 기자와 유방암 환자 파생 된 제노 이식의 라벨링. J. 비스 익스프. (2016).
다음 비디오는 시험관 내 종양 세포로 녹색 형광 단백질 및 루시파라제를 발현하는 렌티바이러스를 도입하는 데 사용되는 PDX 종양 세포(환자 유래 xenografts) PDX 종양 세포를 라벨에 변환하는 기술을 설명합니다.
Protocol
1. PDX 유래 종양 세포의 전도 원심분리기는 종양 세포를 300 g x 5분에서 해리시키고 2ml 유방스피어 미디어에서 재중단하였다. trypan 블루 제외를 사용하여 실행 가능한 셀을 계산합니다(5ml 세척 버퍼에서 소화된 세포를 재일시 중단하고 trypan blue 제외를 사용하여 실행 가능한 셀과 실행 불가능한 셀을 모두 계산합니다. 간략하게, 세포의 50 μl과 트라이판 블루의 50 μl을 혼합하고 혈류계를 사?…
Representative Results
그림 1: 분리된 PDX 셀의 트랜스유도 효율 추적. A) PDX 해리 세포는 pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro 렌즈피바이러스 입자와 의 전염 후 24시간 인간 상피 세포(Lin+ 고갈)를 위해 농축된다. B) PDX-해리 된 세포는 상피 세포 농축없이, pHAGE-EF1aL-루시파제 -UBC-GFP-W와 의 전염 후 72 시간 별도의 실험에서 분리된 세포를 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Cite This Article
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).