Pseudofracture: Um Modelo de trauma agudo do tecido periférico

Summary

Pseudofracture, um modelo reprodutível murino de trauma músculo-esquelético estéril, permite a avaliação de final de mandato pós-traumático respostas imunes. Este artigo descreve a execução processual do modelo passo a passo, incluindo a possibilidade de combinações de modelo experimental para permitir estudo de trauma múltiplo.

Abstract

Após o trauma não é uma resposta hiper-reativa início inflamatória que pode levar à disfunção de múltiplos órgãos e mortalidade em pacientes com trauma; esta resposta é muitas vezes acompanhada por uma imunossupressão atrasada que adiciona as complicações clínicas da infecção e também pode aumentar a mortalidade ^1-9. Muitos estudos já começaram a avaliar essas alterações na reatividade do sistema imune após o trauma. ^10-15
Estudos imunológicos são muito apoiados através da grande variedade de transgênicos e camundongos knockout disponíveis na modelagem vivo;. Destas cepas ajuda nas investigações detalhadas para avaliar as vias moleculares envolvidos nas respostas imunológicas ^16-21

O desafio na modelagem experimental murino trauma é a investigação de longo prazo, como as técnicas de fixação de fratura em camundongos, pode ser complexo e não é facilmente reproduzível. ^22-30

Este modelo pseudofracture, um modelo de trauma facilmente reproduzido, supera essas dificuldades imunologicamente imitando um ambiente fratura extremidade, permitindo liberdade de movimentos dos animais ea sobrevivência a longo prazo sem o uso contínuo e prolongado de anestesia. A intenção é recriar as características de fratura de ossos longos; músculo lesionado e tecidos moles são expostos a danos no osso e da medula óssea sem quebrar o osso nativo.

O modelo pseudofracture consiste de duas partes: a lesão por esmagamento bilateral do músculo de membros posteriores, seguida pela injeção de uma solução para estes músculos osso lesionado. A solução osso é preparado pela colheita dos ossos longos dos dois membros posteriores de uma idade e peso-dador singeneicos. Estes ossos são então esmagados e ressuspenso em tampão fosfato salino para criar a solução óssea.

Fratura de fêmur bilateral é um modelo comumente usados ​​e bem estabelecida de trauma extremo, e foi o modelo comparativo durante o desenvolvimento do modelo pseudofracture. Entre a variedade de modelos disponíveis fratura, optamos por utilizar um método fechado de fratura com lesão de tecidos moles como a nossa comparação com o pseudofracture, como queríamos um estéril ainda proporcionalmente grave trauma modelo periférica tecido. ³¹

Choque hemorrágico é um achado comum no cenário de trauma grave, ea hipoperfusão mundial adiciona um elemento muito relevante para um modelo de trauma. ^32-36 O modelo pseudofracture pode ser facilmente combinada com um modelo de choque hemorrágico de um modelo de trauma múltiplo de alta severidade ^37.

Protocol

1. Instrumento e Preparação do campo cirúrgico: Todos os procedimentos experimentais são realizadas usando técnicas assépticas. Antes de começar, a área experimental devem ser cuidadosamente limpos e esterilizados. A bancada deve ser desinfetada, secas ao ar e depois limpo com álcool 70%. Coloque uma almofada cirúrgica azul e campo estéril vestir na área de trabalho experimental. Todos os materiais e instrumentos são esterilizados em autoclave antes de…

Discussion

Pseudofracture, um modelo reprodutível murino de trauma músculo-esquelético estéril, permite a avaliação da pós-traumático respostas imunes. O modelo pseudofracture imunologicamente imita um ambiente fratura extremidade por meio de recreação das características de uma fratura de ossos longos: músculo lesionado e tecidos moles são expostos a danos no osso e da medula óssea sem quebrar o osso nativo ^38,39 Uma resposta bifásica imunológico pode ser visto a seguir. trauma pseudofracture que consis…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Surgical blue pad		Fisher Scientific	50-7105
Sterile Field dressings		Fisher Scientific	NC9517505
Circulating heating pad 18″x26″		Harvard	py872-5272
Hot bead instrument sterilizer		VWR	11156-002
Stainless steel tray 8″ x 11″		VWR	62687-049
Plexiglass boards (10x15x0.5cm)		University of Pittsburgh Machine shop
Tape rolls 1″		Corporate Express	MMM26001
50cc conical tube		can be purchased through any global vendor
Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone)		VWR	159000-058
Oster A5 clippers w. size 40 blade		VWR	10749-020
Surgical scissors (straight – 12cm)		Fine Science Tools	14068-12
Hemostats curved -18cm		Harvard	81331718
Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm)		Fine Science Tools	11050-10
Gauze 4″x4″		can be purchased through any global vendor
1.5cc microfuge tube		can be purchased through any global vendor
Ice bucket		can be purchased through any global vendor
Mortar and Pestle		Fisher	12-961AA
1cc syringe w/ 25G needle		Fisher Scientific	14-826-88
20G needle		can be purchased through any global vendor
1mL pipetteman		can be purchased through any global vendor
1mL pipette tips		can be purchased through any global vendor
Falcon polystyrene 8ml tubes		VWR	60819-331
Sterilization pouch 3″x8″		VWR	24008
Sterilization pouch 5″x10″		VWR	24010
MacConkey II Agar plate		BD Biosciences	221172
Ethyl Alcohol – 200 proof		Pharmaco-AAPER		[70%]
Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution)		Ovation		70mg/kg
Aerrane (Isoflurane)		Baxter		99.9%
Triadine Povidone Iodine (Betadine)		Triad disposables
Phosphate Buffered Saline (PBS)
Buprenorphine HCl		Bedford Laboratories		0.1mg/kg