鱼藤酮灌胃和图像分析α- synuclein的夹杂物在肠道神经系统的一个使用口服
Summary
帕金森氏病已经涉及到农药的暴露。在这里，我们显示一个方法来提供所需浓度和方法来分析在α- synuclein的积累，在肠神经系统的影响农药的使用胃管。
Abstract
在帕金森氏病（PD）患者中，相关的病理如下特征的模式，特别是肠神经系统 （ENS）1,2，嗅球（OB），迷走“（DMV）3的背运动核，中间外侧脊髓4和黑质核，提供4,5疾病的神经病理分期的基础。的ENS和OB的最暴露的神经结构，首当其冲受到影响的。有趣的是，PD已经涉及到农药暴露6-8。在这里，我们详细显示在我们以前的研究9中使用的两种方法。为了分析的ENS本地的鱼藤酮的影响，我们使用一岁C57/BL6小鼠灌胃管理鱼藤酮。鱼藤酮是一种广泛使用的农药，强烈抑制线粒体复合物I 10。它是高度lipophylic和11在胃肠道吸收不良。我们的研究结果表明，5毫克/公斤鱼藤酮的管理并没有抑制线粒体复合物我的肌肉或大脑的活动。因此，这表明，我们的管理方法，鱼藤酮没有跨hepatoportal系统，是单纯的ENS行事。在这里，我们显示的方法来管理农药使用灌胃和图像分析协议，用来分析在α-突触核蛋白在ENS的积累农药的影响。第一部分显示了一个方法，使所需的精确浓度的农药（鱼藤酮）灌胃。第二种方法演示半自动图像分析协议分析α-突触核蛋白在ENS的积累，使用图像分析软件。
Protocol
1）鱼藤酮灌胃称量动物。 计算总量的鱼藤酮/车辆所需的解决方案。在这种情况下，每克动物体重0.01毫升。 与以前计算的鱼藤酮溶液体积（0.625毫克/毫升鱼藤酮，4％的羧甲基纤维素钠和1.25％，氯仿）或车辆的解决方案（4％羧甲基纤维素钠和1.25％，氯仿），充电1 mL注射器。在这种情况下，对应于5毫克/公斤的鱼藤酮剂量。 拿起鼠标，一只手握住鼠标的尾部，舒?…
Discussion
灌胃给药先前已执行12。然而，因登的手稿，鱼藤酮管理溶解在0.5％的羧甲基纤维素钠（CMSS）单。鱼藤酮是一种高liphophylic物质。因此，鱼藤酮不能被溶解在0.5％的CMSS单独会沉淀，如果这样做的。氯仿的使用创建一个均匀分布的鱼藤酮悬浮，避免沉淀。此外，由于在CMSS农药的浓度较高，管理解决方案的最终体积也明显下降。因此，减少并发症的管理。
我们建议使用?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
佩德罗巴里DE LA的Maza基金会支持这项工作。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotenone | SIGMA-Aldrich | R8875 | Germany | |
| Chloroform | Carl Roth | 3313.1 | Germany | |
| Carboxymethylcellulose | SIGMA-Aldrich | C5678 | Germany | |
| Gavage 1,2 mm x 60 mm | Unimed | Switzerland | ||
| LSM 510 | Zeiss Microscopes | |||
| FIJI | http://pacific.mpi-cbg.de |
References
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Tags
Rotenone AdministrationGavage MethodImage AnalysisAlpha-synuclein InclusionsEnteric Nervous SystemParkinson’s Disease PathologyNeuropathological StagingOlfactory BulbDorsal Motor Nucleus Of The VagusIntermediolateral Nucleus Of The Spinal CordSubstantia NigraPesticide ExposureRotenone Effects On ENSMitochondrial Complex I InhibitionLipophylic PesticideGastrointestinal AbsorptionHepatoportal SystemPesticide Administration Method
Cite This Article
Pan-Montojo, F. J., Funk, R. H. Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System. J. Vis. Exp. (44), e2123, doi:10.3791/2123 (2010).