在免疫功能低下小鼠颅内髓母细胞瘤细胞原位Allografting
Summary
这个协议描述鼠标髓母细胞瘤组织的隔离和分裂，并随后allografting到免疫功能低下的受体小鼠的肿瘤细胞，以开展二次髓母细胞瘤。
Abstract
髓母细胞瘤是最常见的小儿神经系统的肿瘤。小脑颗粒神经元前体（CGNPs）1-4为髓母细胞瘤细 胞的原产地集中于动物研究的一个庞大的身躯。然而，在人类患者（结节，促纤维增生，古典和大细胞/间变性），而事实上，在没有CGNP标记5的异位表达的人类患者的一个子集发现髓母细胞瘤是，髓母细胞瘤亚型的不同临床表现表明，髓母细胞瘤细胞和分子的起源更复杂，远未完全破译。因此，它是必不可少的，以确定是否有替代髓母细胞瘤肿瘤细胞的起源细胞类型，具体的治疗方法可以开发基于。为此，颅内原位基因标记的肿瘤细胞类型肿瘤的发展中，收件人的后续分析allografting将使测定肿瘤细胞的细胞来源。在这里，我们描述了颅内原位allografting髓母细胞瘤细胞从原发肿瘤组织的实验协议，这个过程也可以用于移植建立细胞株的细胞。
Protocol
Discussion
几个关键因素，以确保成功的髓母细胞瘤细胞allografting，产生继发性肿瘤的形成如下：首先，用于组织解离，只有50％Accutase和不过消化的组织，作为长期的酶处理细胞活力显着降低。另外，只使用1毫升的大小Pipetman较小的提示，还可以生成游离细胞的物理损坏。它是好的，有单个细胞和小allografting聚集的混合物。二，混合和平衡的肿瘤细胞的解决方案，每次装货前汉密尔顿注射器。不要使用超过…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项研究是由Vanderbilt – Ingram癌症中心支援津贴（P30 CA068485），儿童脑瘤基金会和美国国立卫生研究院（NS042205）的赠款支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
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