Intracranica allotrapianto ortotopico di cellule di medulloblastoma in topi immunocompromessi
Summary
Questo protocollo descrive l'isolamento e la dissociazione del tessuto medulloblastoma mouse e allotrapianto successive delle cellule tumorali in topi immunocompromessi destinatario al fine di avviare medulloblastoma secondario.
Abstract
Il medulloblastoma è il tumore più comune pediatrici del sistema nervoso. Una grande quantità di studi sugli animali si è concentrata sui precursori neuronali dei granuli del cervelletto (CGNPs) come la cellula di origine per il medulloblastoma 1-4. Tuttavia, le diverse presentazioni cliniche dei sottotipi medulloblastoma nei pazienti umani (nodulare, desmoplastico, classica e grandi cellule / anaplastico), e il fatto che il medulloblastoma si trova in un sottogruppo di pazienti umani senza espressione ectopica di CGNP marcatore 5, suggeriscono che la origini cellulare e molecolare di medulloblastoma sono più complessi e lungi dall'essere completamente decifrato. Pertanto, è essenziale per determinare se vi è un tumore medulloblastoma alternativa di cellule di origine sulla base di quale tipo cellulare specifico modalità terapeutica può essere sviluppato. A tal fine, ortotopico intracranica allotrapianto di organismi geneticamente segnato tipi di cellule tumorali seguita da successive analisi secondaria di sviluppo del tumore nei pazienti consentirà di determinare l'origine cellulare delle cellule tumorali iniziare. Qui descriviamo il protocollo sperimentale per ortotopico intracranica allotrapianto di cellule derivate da medulloblastoma primario tessuto tumorale, e questa procedura può essere utilizzata anche per il trapianto di cellule provenienti da linee cellulari stabilizzate.
Protocol
Discussion
Diversi fattori critici di successo per garantire la cellula medulloblastoma allotrapianto che la formazione di tumori rendimenti secondarie sono le seguenti: in primo luogo, utilizzare solo Accutase 50% per il tessuto dissociazione e non oltre il digest del tessuto come trattamento enzimatico prolungata porta ad una significativa riduzione della vitalità delle cellule. Anche utilizzare solo il Pipetman taglia 1 ml più piccole punte può anche generare danni fisici alle cellule dissociate. E 'bene avere una miscel…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo studio è stato supportato anche da finanziamenti della Vanderbilt-Ingram Cancer Center Support Grant (P30 CA068485), il Brain Tumor Foundation Infanzia e il National Institutes of Health (NS042205).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
- Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma. Science. 326, 1424-1427 (2009).
- Salsano, E. Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1. Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).
