Immunocompromised 마우스의 Medulloblastoma 세포 Intracranial Orthotopic Allografting
Summary
이 프로토콜은 마우스 medulloblastoma 조직의 격리와 분리를 설명하고, 보조 medulloblastoma를 시작하기 위해 immunocompromised받는 생쥐에 종양 세포의 후속 allografting.
Abstract
Medulloblastoma은 신경계의 가장 일반적인 소아 종양이다. 동물 연구의 큰 시체가 medulloblastoma 1-4에 대한 세포 수준의 기원으로 소뇌 과립 신경 세포의 엽 성의 전구 물질 (CGNPs)에 초점을 맞추고 있습니다. 그러나, 인간의 환자 (결절 desmoplastic, 고전 및 셀 / anaplastic 대형) 및 medulloblastoma가 CGNP 마커 5 노 이소성 표정으로 인간 환자의 일부에서 발견되는 사실에 medulloblastoma의 subtypes의 다양한 임상 프레 젠 테이션 것이 좋습니다 medulloblastoma의 세포 및 분자 기원은 지금까지 완전히 해독되지 않도록 더 복잡하고 있습니다. 따라서, 어떤 세포 유형 특정 치료 양상을 개발할 수에 따라 대체 medulloblastoma 종양 세포 수준의 원산지가 있는지 확인하는 것이 필수적입니다. 이를 위해 수신자의 이차 종양 개발의 후속 분석 다음에 표시된 유전자 종양 세포 유형의 allografting intracranial orthotopic는 종양 – 시작 세포의 세포 기원의 결정을하실 수 있습니다. 우리가 일차 종양 조직에서 파생된 medulloblastoma 세포의 allografting intracranial orthotopic에 대한 실험 프로토콜을 설명하고,이 절차는 또한 기존 휴대폰 라인에서 세포를 이식에 사용될 수 있습니다.
Protocol
Discussion
산출 보조 종양 형성은 다음과 같은 것을 allografting 성공 medulloblastoma 세포 수 있도록 여러 가지 중요한 요소 : 첫 번째는 조직 분리에 대해서만 50 % Accutase를 사용하고 연장 효소 치료는 세포 생존에 상당한 감소에 이르게으로 조직을 덮어 소화하지 않습니다. 작은 팁 또한 dissociated 세포에 물리적 손상을 생성할 수 있습니다로도 오직 하나 ML 크기 Pipetman를 사용합니다. 그것은 allografting 하나의 세포…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 밴더빌트 – 잉그램 암 센터 지원 그랜트 (P30 CA068485), 아동 뇌종양 재단과 국립 보건원 (NS042205)에서 보조금에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
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