Induction and Clinical Scoring von chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

Summary

Dieses Video zeigt die Induktion und klinischen Scoring von einem Tiermodell der Multiplen Sklerose: chronisch-rezidivierende experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in DA-Ratten. Die Krankheit, durch die Immunisierung von Ratten mit einer Emulsion, die ganze Ratte Rückenmark und komplettem Freund-Adjuvans induziert, weist klinische Symptome ähnlich der menschlichen Erkrankung.

Abstract

Multiple Sklerose (MS) ist eine chronische entzündliche Erkrankung des zentralen Nervensystems (ZNS), die häufig bei jungen Erwachsenen. Es wird durch Demyelinisierung und Gliazellen zu erschrecken in Bereichen des Gehirns und des Rückenmarks verbreitet charakterisiert. Diese Läsionen verändern Nervenleitung und induzieren die zu Beeinträchtigungen führende neurologische Defizite, die mit der Lage der demyelinisierte Plaques im ZNS (zB Paraparese, Lähmung, Erblindung, Inkontinenz) variieren.

Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) ist ein Modell für MS. EAE wurde zum ersten Mal versehentlich in den Menschen während der Tollwutimpfung induziert, mit Viren auf Kaninchen Rückenmark gewachsen. Rückstände von Rückenmark injiziert mit dem inaktivierten Virus induzierten ZNS Erkrankungen. Nach diesen Beobachtungen wurde ein erstes Modell der EAE in nicht-menschlichen Primaten mit einer ZNS-Homogenat durch Flüsse und Schwenther in 1935 immunisiert beschrieben. EAE ist seitdem in einer Vielzahl von Arten erzeugt worden und kann verschiedene Kurse je nach Art / Stamm und immunisierende Antigen verwendet folgen. Zum Beispiel Immunisierung Lewis Ratten mit Myelin basisches Protein in Emulsion mit Adjuvans induziert eine akute Modell der EAE, während das gleiche Antigen induziert eine chronische Krankheit bei Meerschweinchen.

Die EAE-Modell beschrieben ist hier durch die Immunisierung von DA Ratten gegen DA Ratte Rückenmark in Emulsion in komplettem Freund-Adjuvans induziert. Ratten entwickeln eine aufsteigende schlaffe Lähmung innerhalb von 7-14 Tagen post-Immunisierung. Klinische Symptome folgen einem schubförmigen Verlauf über mehrere Wochen. Pathologie zeigt große Immunsystem Infiltrate im ZNS und Demyelinisierung Plaques. Besondere Überlegungen für die Betreuung von Tieren mit EAE sind am Ende des Videos beschrieben.

Protocol

Induktion und Überwachung von chronisch-rezidivierenden EAE Die Emulsion ist eine 1:1-Mischung von Antigen in wässriger Lösung hinzugefügt ergänzt komplettem Freund-Adjuvans. Es ist sehr wichtig, um das Antigen an das Adjuvans und nicht umgekehrt hinzuzufügen! Es gibt eine Menge von Abfällen, wenn Herstellung und Injektion einer Emulsion. Immer vorzubereiten 1,5 oder 2-mal mehr als das, was Sie brauchen. <span class="jove_content…

Discussion

Es gibt ein paar wichtige Überlegungen für dieses Protokoll.

Genetik der DA-Ratten wird etwas anders sein je nachdem, welche Züchter werden sie von gekauft. Diese Unterschiede können Zu-oder Abnahme der Empfindlichkeit von Ratten die Induktion EAE. Wenn Ihr Ratten anfälliger für EAE sind, werden Sie wollen, um die Stärke der Immunisierung unter Verwendung von nicht-ergänzten komplettem Freund-Adjuvans oder sogar unvollständig Freunds Adjuvans reduzieren. Sie können sich auch die Verringerung der Menge der Emulsion injizier…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s Adjuvant	Reagent	Fisher	DF 311-360-5	Manufactured by Difco
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Reagent	Fisher	DF3114-33-8	Manufactured by Difco
DA rat	Animal	Harlan Sprague Dawley		Females, 7-9 weeks old.
Glass syringes – 5 ml	Tool	Fisher	14-823-10 B
Metal bridge – 18G	Tool	Fisher	14-825-17L
Luer Lok plastic syringes – 3 ml	Tool	Becton Dickinson	309585
Needles – 20G 1 1/2	Tool	Fisher	14-826-5C