Büyük Ölçekli Zebra balığı Tabanlı In vivo Küçük Molekül Ekran

Summary

Zebra balığı güçlü olarak ortaya çıkmıştır<em> In vivo</em> Fenotip tabanlı ilaç ekranları kimyasal ve genetik analiz platformu. Burada, küçük moleküller zebrafish embriyoları kullanılarak büyük ölçekli tarama için basit, pratik bir yöntem gösteriyor.

Abstract

, Küçük embriyo boyutu, hızlı bir gelişme, şeffaflık, doğurganlık ve memeliler için çok sayıda moleküler, morfolojik ve fizyolojik benzerlikleri göz önüne alındığında, zebrafish güçlü olarak ortaya çıkmıştır<em> In vivo</em> Fenotip tabanlı ilaç ekranları kimyasal ve genetik analiz platformu. Burada, küçük moleküller zebrafish embriyoları kullanılarak büyük ölçekli tarama için basit, pratik bir yöntem gösteriyor.

Protocol

1) Zebra balığı Yumurta Toplama Kimyasal ekran gün önce öğleden sonra, 10 ila 20 Zebra balığı üreme tankları kurdu. Her bir tank su ile yetiştiricilik sistemi doldurun. Bir balık ağı kullanarak, her bir yetiştirme tankında iç konteyner bir yetişkin erkek ve 01:59 yetişkin kadın aktarın. Bir bölücü ile erkek ve dişi balık birbirinden ayırın. Kafesleri Etiket ve üzerlerine bir kapak koydu. Ekranın sabah, üreme tankları bölücüler kaldırmak ve çiftleşmek için zeb…

Discussion

Zebrafish bazlı kimyasal ekran planlama yaparken özellikle dikkat sağlamlık fenotip ve arka plan gibi fenotip oranı dikkate alınarak ödenmelidir. Bu kimyasal bastırıcılar kaynaklı bir fenotip ekranlar için özellikle önemlidir. Örneğin, bir transgen ısı-şok indüksiyon kaynaklanan bir fenotip, fenotipe neden olan durum tekrarlanabilir kabul edilemeyecek kadar yüksek yalancı pozitiflik oranları önlemek için tam ekran başlamadan önce eşlenmiş olmalıdır. Dikkatli bir planlama ile, mütevazı bi…

Materials

1. Minimum of 20 pairs of adult zebrafish of desired genotype.
2. Fish nets, Breeding tanks, with removable inner container and dividers (Aquatic Habitats).
3. Petri dishes (10 cm).
4. Plastic tea strainer.
5. Wash bottle containg embryo water.
6. Disposable polyethylene transfer pipettes.
7. Polystyrene 96-well round-bottom assay plates (Corning COSTAR; Lowell, MA).
8. Glass Pasteur pipette (Fisher Scientific).
9. Manual pipette pump, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ).
10. E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl₂ , 0.33 mM MgSO₄ , containing 0.003% PTU (phenylthio-carbamide, Sigma; St. Louis, MO). PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil.
11. 12-channel pipettes, 2-20 μL (Eppendorf).
12. 12-channel pipettes, 3-300 μL (Eppendorf).
13. Disposable polystyrene pipette basin, 50 mL (Fisher Scientific).
14. Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use.
15. Aluminum sealing tape for 96-well plates (Nunc, Rochester, NY).
16. DMSO (Sigma, St. Louis, MO).
17. Basic incubator, 28.5°C (Fisher Scientific).
18. Stereomicroscope with transmitted light base (Leica Microsystems, Bannockburn, IL).