كما برز الزرد قوية<em> في الجسم الحي</em> منصة لشاشات المخدرات النمط الظاهري القائم على التحليل الكيميائي والجيني. هنا ، علينا أن نظهر بسيطة ، طريقة عملية واسعة النطاق لفحص الجزيئات الصغيرة باستخدام الأجنة الزرد.
Abstract
نظرا لحجمها الصغير الجنين ، التطور السريع ، والشفافية ، والخصوبة ، والعديد من أوجه الشبه الجزيئي ، المورفولوجية والفسيولوجية للثدييات ، برز الزرد وقوية<em> في الجسم الحي</em> منصة لشاشات المخدرات النمط الظاهري القائم على التحليل الكيميائي والجيني. هنا ، علينا أن نظهر بسيطة ، طريقة عملية واسعة النطاق لفحص الجزيئات الصغيرة باستخدام الأجنة الزرد.
Protocol
1) جمع بيض اسماك الزرد بعد ظهر يوم قبل يوم من الشاشة الكيميائية ، وإعداد 10-20 الدبابات تربية الزرد. ملء كل صهريج ماء من نظام تربية الأحياء المائية. باستخدام صافي الأسماك ، نقل أحد الذكور والإناث البالغين الكبار 1-2 إلى حاو…
Discussion
عند التخطيط لشاشة الكيميائية الزرد مقرها ، يجب إيلاء اهتمام خاص لمتانة النمط الظاهري قيد النظر ، ومعدل خلفية النمط الظاهري من هذا القبيل. وهذا أمر مهم لا سيما بالنسبة للشاشات المكثفات الكيميائية من النمط الظاهري المستحث. على سبيل المثال ، عن النمط الظاهري التي تسببه…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Minimum of 20 pairs of adult zebrafish of desired genotype.
Fish nets, Breeding tanks, with removable inner container and dividers (Aquatic Habitats).
Manual pipette pump, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ).
E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthio-carbamide, Sigma; St. Louis, MO). PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil.
12-channel pipettes, 2-20 μL (Eppendorf).
12-channel pipettes, 3-300 μL (Eppendorf).
Disposable polystyrene pipette basin, 50 mL (Fisher Scientific).
Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use.
Aluminum sealing tape for 96-well plates (Nunc, Rochester, NY).
DMSO (Sigma, St. Louis, MO).
Basic incubator, 28.5°C (Fisher Scientific).
Stereomicroscope with transmitted light base (Leica Microsystems, Bannockburn, IL).
Hao, J., Williams, C. H., Webb, M. E., Hong, C. C. Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J. Vis. Exp. (46), e2243, doi:10.3791/2243 (2010).