बड़े पैमाने पर Zebrafish आधारित Vivo में लघु अणु स्क्रीन
1Division of Cardiovascular Medicine, Department of Medicine,Vanderbilt University School of Medicine, 2Department of Pharmacology,Vanderbilt University School of Medicine, 3Vanderbilt Institute of Chemical Biology,Vanderbilt University School of Medicine, 4Research Medicine, Veterans Affairs TVHS,Vanderbilt University School of Medicine
Summary
Zebrafish एक शक्तिशाली रूप में उभरा है<em> Vivo में</em> Phenotype आधारित दवा स्क्रीन और रासायनिक आनुवांशिक विश्लेषण के लिए मंच. यहाँ, हम बड़े पैमाने पर zebrafish भ्रूण का उपयोग कर छोटे अणुओं की स्क्रीनिंग के लिए एक सरल, व्यावहारिक विधि प्रदर्शित करता है.
Abstract
उनके छोटे भ्रूण आकार, तेजी से विकास, पारदर्शिता, उपजाऊपन, और स्तनधारियों के लिए कई आणविक, morphological और शारीरिक समानता को देखते हुए, zebrafish एक शक्तिशाली रूप में उभरा है<em> Vivo में</em> Phenotype आधारित दवा स्क्रीन और रासायनिक आनुवांशिक विश्लेषण के लिए मंच. यहाँ, हम बड़े पैमाने पर zebrafish भ्रूण का उपयोग कर छोटे अणुओं की स्क्रीनिंग के लिए एक सरल, व्यावहारिक विधि प्रदर्शित करता है.
Protocol
1) Zebrafish अंडे संग्रह रासायनिक स्क्रीन के दिन से पहले दोपहर में 10 से 20 zebrafish प्रजनन टैंक सेट. प्रत्येक टैंक जलीय कृषि प्रणाली से पानी के साथ भरें. एक मछली जाल का प्रयोग, प्रत्येक प्रजनन टैंक में आंतरिक कंटे?…
Discussion
जब एक रासायनिक zebrafish आधारित स्क्रीन की योजना बना, विशेष रूप से ध्यान विचाराधीन phenotype और ऐसे phenotype की पृष्ठभूमि दर की मजबूती के लिए भुगतान किया जाना चाहिए. यह एक प्रेरित phenotype के रासायनिक दमन के लिए स्क्रीन के लि…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
- Minimum of 20 pairs of adult zebrafish of desired genotype.
- Fish nets, Breeding tanks, with removable inner container and dividers (Aquatic Habitats).
- Petri dishes (10 cm).
- Plastic tea strainer.
- Wash bottle containg embryo water.
- Disposable polyethylene transfer pipettes.
- Polystyrene 96-well round-bottom assay plates (Corning COSTAR; Lowell, MA).
- Glass Pasteur pipette (Fisher Scientific).
- Manual pipette pump, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ).
- E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthio-carbamide, Sigma; St. Louis, MO). PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil.
- 12-channel pipettes, 2-20 μL (Eppendorf).
- 12-channel pipettes, 3-300 μL (Eppendorf).
- Disposable polystyrene pipette basin, 50 mL (Fisher Scientific).
- Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use.
- Aluminum sealing tape for 96-well plates (Nunc, Rochester, NY).
- DMSO (Sigma, St. Louis, MO).
- Basic incubator, 28.5°C (Fisher Scientific).
- Stereomicroscope with transmitted light base (Leica Microsystems, Bannockburn, IL).
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Cite This Article
Hao, J., Williams, C. H., Webb, M. E., Hong, C. C. Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J. Vis. Exp. (46), e2243, doi:10.3791/2243 (2010).